西农萨能奶山羊β-1g与κ-casein基因和产奶性能关系的研究.pdfVIP

258ll生国动擅遗撞直弛叠塞迸星 西农萨能奶山羊B-19和K-casein基因 与产奶性能关系研究+ 陈宏1，2 李瑞彪1 雷初朝1 孙维斌1 雷雪芹1，3 胡沈荥1 郑元林2 (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨陵，712100) (2．徐州师范大学生物技术研究所，江苏徐州，221009) (3河南科技大学动物科技学院，河南洛阳，471003) 频率为0．91，B的频率为0．09，基因型为AA的个体其各胎次产奶量均比AB型高，其中在第二、三胎次 间的差异不显著(P0．05)。 关键词 萨能奶山羊；PCR-RFLP；PCR—SSCP；产奶性状；B一乳球蛋白；K-酪蛋白 乳清蛋白和酪蛋白是牛、羊乳中的两类主要蛋白质，占到牛、羊乳蛋白总量的95％，p哥L球蛋白(p一 19)是乳清蛋白的主要组分。自1955年，AschaHenbrg和Dreng等首次揭示乳球蛋白的两种变异型后， 乳蛋白多态性和生产性状相关性的研究逐渐成为多态性研究领域的一个热点…。目前在DNA水平上 对乳蛋白的基因多态性报道亦不鲜见，但这些研究一般都集中于牛上。在山羊上乳蛋白基因多态性的 研究相对较少。酪蛋白多态性的研究大都集中在ot—slcasein(CSNlSl)、q-S2 乳蛋白基因连锁信息认识的加深，人们开始把x—casein基因本身作为遗传标记分析其对泌乳性状的影 响”o。奶山羊是我国部分地区改善人们饮食结构和致富的主要动物，特别是西农萨能奶山羊已推广到 基因5’侧翼区和K—casein基因第四外显子的多态性及与产乳性能的关系，以便用于西农萨能奶山羊产 奶性状的早期辅助选择。 1材料与方法 1．1实验动物 实验动物来自陕西省萨能奶山羊种羊场核心群，采集基础母羊74只，每个个体静脉采血10ml，肝 素抗凝，低温带回实验室，一80。C保存备用。整理每个个体前4胎的产奶量记录。 1．2限制性内切酶及试剂 限制性内切酶SamI、蛋白酶K、dNTPs、TaqDNA酶、琼脂糖，二甲苯青FF、丙烯酰胺(Act．)，N， 公司提供。SD004Marker为由鼎国生物工程有限公司提供。 ●[基金来源]陕西省自然科学基金(99SM06)，杨凌生物技术育种工程技术中心基金(1999—6)资助 net 263 屋刍动擅佥王遗传燕苤塑左速|-259 I．3基因组DNA的提取 按照Chen㈩的方法提取。分光光度计测定其浓度后，一80％保存。 1．4 PCR引物 7；K—casein基因第四外显子扩增引物上游 CGTCCTGGGG-3，，下游为：5-GGCCTYrCATGGTCTGGGTGA-3 1．5 7侧翼区PCR-RFLP分析 9-乳球蛋白基因5 dNTPs，100ng 25¨l反应体系包括1UTaqDNA聚合酶，2mmol／lMgCl2，10×buffer2．51xl，100pmol／1 95℃30s、63。C1min,72。C90s；最后72℃延伸5rain。扩增产物经SmaI限制酶消化后琼脂糖凝胶电泳 检测。 1．6 K—casein基因第四外显子PCR—SSCP分析 PCR反应体系与条件除退火温度为50℃外基本同上。扩增产物经SSCP分析变性缓冲液处理后， 用8％的聚丙烯酰胺凝胶电泳、染色及判型分析。 2实验结果 2．1 9-乳球蛋白基因5’侧翼区PCR—RFLP的检测 2．1．1扩增结果与多态性 显子的122bp。由图中可以看到扩增产物带纹清晰，能满足酶切反应的要求。 围1 PCR扩增产物电泳图谱 4条带组成；AB型由 472bp、231bp、181bv、50bp及7bp5条带组成，其中7bp这条带不能在电泳图上显示出来。从图2可以 4 看出，泳道3为AB型，泳道1