西农萨能奶山羊泌乳期不同组织PITX2基因的甲基化谱的研究.pdfVIP

，j≈—P SeventhNationalConferenceofofAnimal ehTygolon耐h(etoi8 Ani瓣mal8iote(幺 弱{i暨新疆畜牧科学院第六次学术年会．_毒§害不g爨黼燃．nfemnce 西农萨能奶山羊泌乳期不同组织PITX2基因的甲基化谱研究 赵海谕1，周瑞2，周新字2，甘鹏2，潘传英。，雷初朝‘，蓝贤勇1。’，陈宏“+ 1．西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌，712100：2．西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌，712100 关键词：西农萨能奶山羊；泌乳期；PITX2基因；甲基化 摘要：通过BSP研究发现，西农萨能奶山羊泌乳期不同组织PITX2基因启动子区甲基化水平较低，其中脂 肪的甲基化水平最低(0．41％)，显著或极显著低于心脏、脾脏、肌肉和乳腺组织。 引言 目前，我国奶山羊业稳定、健康、持续发展的关键问题是解析奶山羊泌乳的分子机理。PITX2基因属 于PTX亚家族，在动物脑垂体、器官发育、左右不对称发育过程中起重要作用，并参与调控WnVlB信号通 路，该基因突变导致人类多种遗传疾病发生和小鼠胚胎死亡。因PITX2基因在下丘脑．垂体一肾上腺(HPA) 通路中调控翩和PRL基因的表达，故推测它在奶山羊泌乳调控中可能起着重要作用。作为最重要的表观遗 传修饰途径，尽管DNA甲基化不改变基因的核苷酸序列，但却依然调控着基因表达，调节着细胞的生长与 分化。为此，本研究以DNA甲基化为切入点，解析PITX2基因在奶山羊不同泌乳期的甲基化谱，为研究奶 山羊泌乳机制的研究提供科学资料。 材料与方法 西农萨能奶山羊泌乳期不同不同组织样品(心脏、肝脏、脾脏、肺、脂肪、肌肉和乳腺)采自陕西杨 凌；利用标准酚．氯仿法提取基因组DNA，经甲基化修饰试剂盒处理后，再通过Methprimer在线软件设计的 sx寸引物进行扩增，经纯化、TA克隆、鉴定后送20～30个阳性克隆测序，最后利用Fisher’S精确概率进行 cpG位点的甲基化差异分析，并借助在线软件Matlnspector预测转录因子。 结果与分析 在PITX2基因的C口G岛分析，扩增230 bp的启动子区片段(MPR2区域，含21个CpG位点)。心脏、肝 脏、脾脏、肺、脂肪、肌肉和乳腺中P／TX2基因甲基化水平分别为：3．70％、1．59％、4．31％、1．79％、 4、AP．2、CAP、SPI、SMAD、MYBL、HSF、TF 录因子的结合靶点。 讨论 本课题组前期研究发现，西农萨能奶山羊血样基因组DNA中PITX2基因启动子区甲基化对泌乳性能有 显著影响，而且低水平组具有高甲基化、高水平组具有低甲基化的特征，但不同组织该基因甲基化谱未 知。本研究通过泌乳期西农萨能奶山羊不同组织甲基化模式研究发现，该基因在西农萨能奶山羊泌乳期不 同组织中均维持一种较低的甲基化状态，与本课题组前期血样PITX2基因启动子区甲基化水平比较低(2％一 5％)的结果一致，可能与该基因在泌乳期不同组织中启动了大量基因表达有关。有趣的是，PITX2基因在 脂肪细胞中的甲基化水平明显低于在其他组织，与现有相关文献报道基本相符。例如：PITX2自身参与 肪细胞分化为脂肪细胞；Kruppel样转录因子在脂肪细胞的分化方面发挥着重要的作用，有些Klfs家族的转 录因子促进脂肪细胞的分化，有些则相反。为此，本研究推测KIfs家族中的某些促进脂肪细胞分化的转录 因子可能参与了用册基因在脂肪中的表达过程。当然，本课题组的下一步工作将是研究PITX2基因在不同 组织之间的表达及其与甲基化水平的关系，期望为奶山羊泌乳机制研究提供科学资料。 致谢 然科学基金项目(No，201 1JQ3009)项目资助。 4通讯作者