氩氦刀冷冻消融治疗乙型肝炎相关性肝细胞癌前后PD-1变化及其与患者预后的相关性.pdfVIP

bloodmononuclearcell，PBMCs) 应用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral rain， 和PD．1．PE，以检测CD8+T细胞上PD．1的表达。每组均在加入lOul抗体后均避光孵育20 入PBS洗涤2遍之后，150ul 他流式抗体均购自美国BD公司。 1．4 HCC患者外周血PD．1分子表达与临床特点的相关性分析以CD8+T淋巴细胞上表 DNA载量)的相 直径，肿瘤数目、AFP水平、肝脏功能Child—Pugh分级、肿瘤血管侵犯、HBV 关性。 1．5氩氦刀治疗前后HCC患者外周血PD．1分子表达的动态变化及随访研究141例 HCC患者中109例早、中期肝癌接受氩氦刀治疗，均获得肿瘤完全清除，检测其术前1天(以0 周表示)，以及术后l、4周外周血PD．1分子表达。术前术后定期进行增强螺旋CT检查／增强 survivaltime，TFS)， MRI检查，以评估其疗效。首要随访终点为肿瘤无复发生存时间(tumor-free survival 次要随访终点为总生存时间(overalltime，OS)。TFS时间从冷冻治疗开始到肿瘤复发： OS从冷冻治疗开始到患者死亡或者随访满36个月。所有109例病人均完成随访。 1．6统计学处理 采用SPSS13．0软件进行统计学分析。计量资料以灶s表示，两组间比 较采用Mann-Whimey非参数U检验；计数资料以率表示，采用贮检验进行分析。采用 回归模型分析多个因素对患者预后的影响。P0．05表示差异有统计学意义。 2、结果 2．1 PD．1分子的表达 将HCC患者按照BCLC进行分期，早期HCC患者外周血PD．1 分子为表达为6．660／硅3．52％，中期为13．720／硅5．29％，进展期为20．280／硅1 1．89％(图1)，各分期 的患者间均有统计学差异(P0．05)，提示PD．1分子的表达随肝癌进展而逐渐增加。 -101- 4 圄 sfage GatingStrategy 。t,9{_≯； ：圆黟二 09jj 。罐 |’j ||L煳多?～…．jlj i FSC ，～t… ，、 CO；。 l雾l i＼ 8溘～…毒。隧～…．型 ＼川I CD3 一蛙匠艇 141例乙肝相关性HCC患者外周血PD．1分子的圈门策略及表达 A：外周血PD．1分子的圈门策略及典型图 B：PD．1分子的表达随着肿瘤的进展逐渐增高，HCC患者各组之间具有统计学差异 2．2 HCC患者外周血PD．1分子表达与临床特点的相关性分析由表2可见，肿瘤直径 及肿瘤血管侵犯与PD．1频率相关，而性别、年龄、AFP水平、肿瘤数目、Child．Pugh分级及HBV DNA载量与PD．1频率无关。 2．3氩氮刀术后外周血PD．1分子表达的动态变化：由图2B可见，在氩氨冷冻消融治疗后1 周，无论是早期肝癌组还是中期肝癌组，HCC患者外周血PD．1分子表达较术前升高(P0．05)， 术后4周较术前明显下降(P0．05)。同时我们可以观察到患者术后l周的肝功损害明显，到术 后4周其肝功基本恢复正常(表3)。其中11例术后复发的病例，我们可以看到复发时其PD．1 分子的表达较复发前(氩氦刀术后4周)明显升高(图2A)。图2C显示小肝癌患者经氩氦刀冷 冻消融后肿瘤完全清除，随访到33月无肿瘤复发。图2D显示中期肝癌患者经氩氦刀冷冻消融 后肿瘤完全清除，随访到18月原肿