SIAH2与P-ERK在乳腺癌中的表达及其临床意义.pdf

fI II IIIII 807 实验结果………………………………………………．．14 讨论……………………………………………………19 结论……………………………………………………20 四、本研究创新的自我评价……………………………………．．21 五、参考文献………………………………………………．．22 六、附录 综述……………………………………………………24 在学习期间科研成绩………………………………………．32 致谢……………………………………………………33 个人简历………………………………………………．．34 ·中文论著摘要· SIAH2与P．ERK在乳腺癌中的表达及其临床意义 刖 罱 乳腺癌是危害女性身体健康的恶性肿瘤之一，病理学特征为浸润性生长，所 以促进乳腺癌发生和生长的相关因子一直是分子生物学的研究重点。目前研究已 inabsentia 经证实SIAH2(seven homologues)在多种癌组织中都有异常表达。丝 activatedkinase 裂原活化蛋白激酶(mitogen protein MAPK)途径中的细胞外信号激 酶(extracellularsignalregulated ERK的活性形式，ERK信号途径因为能够以正性调节的方式调控肿瘤生长而备受 关注。已有研究表明SIAH2与P．ERK可能有关联，那么在乳腺癌中SIAH2是否也通 过调节活化的ERK途径发挥作用，这对指导乳腺癌的临床诊断和治疗具有重要临 床意义。本研究应用免疫组织化学和Westernblot检测P．ERK与SIAH2在乳腺组织 中和乳腺细胞系的表达情况，并观察两者的表达是否具有相关性，并进一步研究 腺癌细胞生长。实验结果可为S队H2小分子抑制剂应用于乳腺癌治疗提供相应的 理论依据，为乳腺癌治疗开辟新途径。 材料和方法 一、材料 (一)临床资料 选择中国医科大学附属第一临床医院病理科140例乳腺患者手术切除肿物的 均年龄49．29岁。所有患者术前均未做放化疗以及免疫治疗，有完整的病历资料。 依据WHO2003年的乳腺肿瘤组织学分类标准分类，乳腺浸润性导管癌伴淋巴结 转移38例，乳腺浸润性导管癌淋巴结无转移38例，乳腺导管原位癌44例，乳腺 正常上皮20例。Westernblot检测所用的30对乳腺浸润性导管癌(包括在76例 浸润性导管癌中)及正常乳腺上皮新鲜组织，切除后立即置于．70C冰冻保存。 (二)细胞系 本实验储备并由已有的细胞复苏而得。 (三)主要试剂 Cruz 鼠抗人SIAH2和P．ERK多克隆抗体，兔抗人ERK多克隆抗体，购自Santa 公司。S-P超敏免疫组化试剂盒(KIT2971 均购自福州迈新生物技术开发公司。Western blot用，兔抗人多克隆抗B．actin抗 体，羊抗兔和兔抗鼠二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司。DMEM购自美国 (sc．37497)和SIAH2的非特异性siRNA(control Cruz公司。 二、方法 (一)免疫组织化学技术 组织化学染色。PBS代替一抗作为阴性对照，利用已知阳性片作为阳性对照。阳 性判定：以黄色或棕黄色颗粒染色为阳性反应，P．ERK阳性表达于细胞浆和细胞 核， SIAH2IjB性表达于细胞核。参照温媛媛等…报道的方法作为免疫组织化学 阳性判断标准，即每张切片在光镜下随机选取5个高倍视野(400倍)，每个视野计数 100个瘤细胞。根据阳性细胞百分率，无阳性细胞为0分，阳性细胞1％～50％为1 分，阳性细胞51％--75％为2分，阳性细胞≥75％为3分；按染色强度：1分呈浅黄色， 2分呈黄色，3分呈棕黄色。阳性细胞