以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的ELISA方法的建立及其评价.pdfVIP

一560一 第十七次全嗣职_k病学术交流会论文集 潮北寅昌 异提示运传因素起一定豹作瑶。目前研究鞍多的是针对ALAD基因多悉性和铅易感性的关系。对比分掇各 高加索白人中ALAD2等位基因的分布频率约为10％。lI5“l。在汉族人群中约为3．3％171。本研究显示172 名工人没蠢发现ALAD2等垃摹因，这可g￡是困隽雉域差异秘本次调查的样本含量较少。有学者研究表踞， ALAD基因型和铅作业工人的细胞遗传学损伤缺乏相关性：经多重回归分析显示，职业性铅暴露和吸烟可 以影响姐妹染色单体互换的水平，但ALAD基因型没有任何明显的影响口】，两种不同ALAD基因型携带者 血铅、尿铅水平与ALAD活性之问没有显著的相关性{9l。本调查研究中，乙组的直铅水平明显嘉于甲组， 差异具有统计学意义。但因为没有发现ALAD2等位基因，因此，本次调查发现铅接触工人血铅水平的高 低与ALAD基因型没有关系。 成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的ELISA方法的建立及评价 秦逸秋1孙立山2周文达5刘长河‘沈睿琳1甄子剐3 00336 1上海市疾病预防控制中心2 2上海市东方医院200120 3 3上海交通大学医学院医学检验重点实验室20002 人巨细胞病毒(human 静不同豹感染综合征，在免疫功能受损者中可；I起严重的撼染，甚或致死“。’。既往HCMV感染的血渍学检 测多采用以组织培养的病毒裂解物作抗原，但由于其抗原成分复杂；存在潜在细胞强白的污染、与其它疱 疹病毒存在交叉反应”‘“。本文以固相多肽合成技术合成了7段抗琢性麟段，并选择裔反应性和特异性的肽 法学评价。 l材料和方法 以鞠相多肽合成技术含戒HcMv结核『蛋自7段强抗原性默段”一，并以离子交换层折及反相商效液相色谱纯 化分析，纯度达95％以上。 性标本65例，阴性标本20例；IgM抗体阳性标本30例，阴性标本33铡。 u u 1．1包被用抗原的最适工作浓度选择：用包被缓冲液将抗原肽作一系列稀释，分别以5g／ml，10g／ml，20 p p g／ml，30g／ml，50”g／ml的浓度包被微孔板；取强阳性、弱阳性和胡性血清各一份．戬I：100稀释后， 按间接ELISA方法测定；选择强阳性标本的吸光度值为0．8左右，明性标本的吸光度值小于0．1的抗原肽 包 被浓度为最适工作浓度。 8．0 1．2三种不薅包被缓冲液豹}E较：分裂以0．02mol／LpH pB9．0碳酸盐缓冲液作为包被抗原缓冲液。利用上述确定的多肽包被量进行包被．分别测定阳性血清及阴 性血清各2份，及1份标本稀释液，比较结果选择最佳包被用缓冲液。 1．3吝脓段懿抗体反反性比较：将新合成的七段肽段SPl—7，以pH9．0碳酸盐缓冲液稀释至终浓度为20 p u g／ml，以每孔100 附刺按1：10进行稀释，并静置10分钟．然后加入标本稀释液进～步稀释，最终的稀释度为1：100。共 测定}犯Mv IgG抗体弼性盘游龉铡，I群阳牲矗渍30侧。 1．4Hc州特异性IgG、IgM抗体测定：根据前述所得到的各肽抗体反应性不同，对于HCMVIgG抗体的测定 选择台成肽SPl、SP2、SP5、SP6联合包被。对于HcMv 第十七次全围职j啦病学术交流会论文集 湖北宜昌 ．561． u 被。以多肽直接包被，将上述备肽溶解谯PH9．6碳酸盐缓冲液中，使各肽终浓度为10 g／ml，以此溶液作 u 为包被用抗原液。每孔100l，进行包扳。对上述标本进行测定，同时与欧蒙HC～ff抗体检测ELISA试剂盒 (IgG