实时荧光RT-PCR检测婴幼儿腹泻轮状病毒的临床价值.pdfVIP

现代实用 医学 2011年 5月 第 23卷 第 5期 blastulaofrmationofmouseoocytesin 2005，20(1)：26—29． l244·l247． vitro[J]．JHuazhongUnivSciTechnolog [3】 杨桂云，王佩娟，贾晓斌，等．补肾活血汤对 [55】MacklonNS，PietersMH，HassanMA， MedSci，2007，27(4)：468—470． 小鼠体外受精及其早期胚胎发育的影响 eta1．Aprospectiverandomizedcompar— [2】LoutradisD，Stefanidis KousidisI，eta1． J【]．中国中西医结合杂志，2001，7(7)： ison ofsequentialversusmonoculture Effectofhumanhydrosalpinxfluidonthe 522．524． systemsforin-v·itrohumanblastocystde-- developmentofmouseembryosandrole [44】 MilkiAA，HinckleyMD，BehrB．Com- velopment[J]．Hmu Reprod，2002，17(10)： oftheconcentrationofgrowthfactorsin parisonofblastocystrtansfertoday trails- 2700．2705． culturemedium wiht nadwithouthydro ferwiht assistedhatchinginhteolderpa- 收稿 日期：2010．10．09 salpinxfluid J【】．GynecolEndocrinol， tient[J】．FertilSteril，2002，78(6)： (本文编辑：姜晓庆) 实时荧光RT-PCR检测婴幼儿腹泻轮状病毒的 临床价值 邱建达 【摘要】目的 探讨实时荧光RT-PCR检测婴幼儿腹泻A组轮状病毒的应用价值。方法 采用实时荧光RT-PCR 检测 178例婴幼儿腹泻患者的粪便样本中A组轮状病毒RNA，并与胶体金免疫层析方法进行比较研究。结果 实时荧光RT-PCR的敏感性达到 10copiesm／l；实时荧光RT-PCR法病毒检出率51．1％，胶体金免疫层析法检出率 48．9％；差异无统计学意义 0．05)。结论 实时荧光RT-PCR技术具有简便、快速、灵敏和准确的特点，对轮状 病毒导致的婴幼儿腹泻的早期诊断、治疗及流行病学调查有重要作用。 【关键词】 婴儿；幼儿；腹泻；轮状病毒属；检测 doi：10．3969~．issn．1671—0800．2011．05．050 【中图分类号】 R725．7 【文献标志码】 A 【文章编号】 1671。0800(2011)o5．057I-02 ．． 腹泻是一种常见的儿科消化系统疾 医院2009年 9月至2010年 4月收治的 钠注射液)，密封，立即用于检测；也可保 病，好发于春秋两季，多为病毒性感染引 门诊及住院病毒性腹泻忠儿 178例，其 存一20℃以下待测，保存期 3个月，标 起的腹泻 “，多发年龄为 6个月至 6岁， 中男87例，女91例；年龄 4个月至6岁， 本送检应采用 0℃。 以水样便多见，严重者可以引起水、电解 平均(3土2)岁。 1．3．2 标本总RNA提取 取冷冻保存 质絮乱，甚至危及生命。目前认为其主 1．2 仪器与试剂 ABI7000荧光定量 标本融化，混匀，采用加拿大BIOBASIC 要病毒为轮状病毒 (RV)。RV的检测方 PCR仪为美国ABI公司产品；冷冻离心 公司RNA提取试剂盒，按操作说明书进 法有经典的电镜观察、聚丙烯酰胺凝胶 机为法国太阳公司产品；A组RV实时 行，最后提取物加入 30ul纯化水溶解 电泳、ELISA方法及胶体金快速检测 ， 荧光RT-PCR检测试剂盒 (含A组轮状 RNA，室温静置2min，13000rm／in，离心 在基因检测上有核酸探针技术、逆转录 病毒RNA标准品)为上海之江生物科技 1min，立即进行实时荧光RT-PCR检测。 巢式PCR、基因芯片以及最近发展的实 有限公司产品；引物及探针设计：RV-F 1．3_3 实时荧光RT-PCR检测反应混合 时荧光RT-PCR方法 。本文采用实时 为 5