温针对大鼠腰神经根受压模型中PLA2的调节作用.pdfVIP

1.1 实验动物和试 、仪器 选择雄性SD 大鼠60 只、三月龄、清洁级、体重250±50g,由上海交通大学 属第六人民医院实验动物中心提供，购 自上海中科院。PLA 试剂盒由 2 美国的 RD systems 公司提供,批号为 514010。 MULTISKAN EX 型酶标仪由 上海龙华医院科技中心提供。 1.2 分组和治疗方案 正常组 （n=12）：不造模，不接受任何治疗和处理，自由饮食摄水14 天。模 型组 （n=12）：造模后不予治疗，自由饮食摄水 14 天。 比可组 （n=12）：造模 后予以 比克（剂量为成人日剂量的30 倍）灌胃连续治疗14 天。针刺组（n=12）： 造模后予以针刺治疗14 天。持 1 寸针 针，取穴受压神经根相应节段右侧的夹 脊穴，穴位定位参照林文注主编的 《实验针 学》（上海科学技术出版社出版） 有关标准。针刺深度0.5 寸， 针20 分钟。温针组 （n=12）：造模后予以温针治 疗，持1 寸针 针，针柄上装上直径0.5cm、高1cm 的艾粒一颗，燃烧至灰烬， 二壮。取穴同针刺组。 1.3 大鼠腰神经根受压模型的建立 手术方法：腹腔注射氯胺酮 （0.10－0.12g/kg 体重），麻醉满意后，剪毛， 固定，消毒，铺无菌巾，以 L5-6 突间隙为中心，取后背正中切口，长约4cm， 切开皮肤，钝性分离椎旁肌，以拉钩牵开，咬出L5-6 突、右侧椎板和关节突， 在手术放大镜下充分暴露右侧 L 神经根，将特制的硅胶片（大小4mm*1mm*1mm， 5 重20±1mg,先于75％酒精中消毒3 小时,置于0.1％新洁尔灭中保存）置于右 侧L 神经根出硬膜囊处，局部固定，牢固，逐层缝合，无菌纱布覆盖，术后大 5 鼠苏醒，放回 中观察。 动物造模后，为确认造模成功，处死二只大鼠进行HE 染色观察。下面 上 照片。 288 正常组 图1 模型组 图2 HE 染色显示，正常组可见神经根形态正常，有髓神经纤维大小基本一致， 轴突位于中央，髓鞘位于周围，呈红色网状结构。模型组可见神经纤维周围明显 充血、水肿、炎性细胞浸润，神经纤维结构松散，周围神经有髓纤维明显减少， 髓鞘广泛节段性脱失，血管扩张。提示造模成功。 1.4 计方法 __ 每组样本均数值以“均数±标准差”（X±s）表示。利用统计软件SPSS13.0 for Windows 版进行统计分析，组间比较采用单因素方差分析。P0.05 有统计 学意义，P0.01 有显著性差异。 1.5 检测指标及方法 （1）原理：酶的作用是催化底物反应，在底物相对于酶过量的条件下，所有的 酶均能与底物结合。本试剂盒使用一种sPLA 的特异性底物，可生成带巯基的结 2 合物,这种巯基产物可以与DTNB(显色剂)反应。用酶标仪在405nm 下，测定显色 物的吸光度OD 值，根据吸光度OD 值反映了底物被水解的量，再根据试剂盒提供 的标准品 （已知浓度）酶量随浓度改变的曲线 （酶浓度曲线），可推算出 PLA2 的含量。 （2） sPLA Kit 组成： 2 ①酶标孔板 96Well Plate ②sPLA2 Standard(标准品) 0.12ml ③Reaction Buffer(缓冲液) 15ml ④sPLA2 Substrate （底物） 2 ×3ml 289 ⑤Color Reagent （DTNB，显色剂） 3ml ⑥Stop Solution （终止液） 3ml