GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中P16基因甲基化状态的研究.pdfVIP

化学物质与健康 GAGGGTGGGGTGGATTGT．3’。下游引物为：5-CAACCCCAAACCACAACCATAA．3’。 TTAGAGGGTGGGGCGGAT P16甲基化引物(P16．蛐上游引物为：5’一TTA CGC．3’．下游引 GAACCGCGACCGT从一3’。 物为：5’-GACCCC I．3甲基化特异性PCR检测P16基因甲基化状态 使用MSP引物，以亚硫酸盐修饰后的DNA为模板，进行PCR扩增反应。PCR扩增产物 经3．O％的琼脂糖凝胶电泳Ooov，30min)，EB染色后紫外灯下照相，并用凝胶成像分析系统进 行观察并照相。重复三次。 2．结果 2．1．1转化早期及转化前期：正常对照组及DMSO溶剂对照细胞中该基因启动子区均表现为非甲 基化，而GMA组细胞中表现为不同程度的甲基化，阳性对照表现为甲基化； 2．1．2转化后期：正常对照组细胞中该基因启动子区表现为非甲基化，而DMSO溶剂对照组及 Gm组细胞中均表现为部分甲基化，阳性对照表现为甲基化。 3．讨论 DNA甲基化导致肿瘤发生的机制包括三方面：(1)启动子区域的去甲基化可以引起癌基因的 过量表达，使得原来沉默的转录子被激活；(2)抑癌基因启动子的CpG岛甲基化会使抑癌基因的 表达关闭，降低基因的表达量：(3)过甲基化可以诱导抑癌基因发生点突变。CpG岛高甲基化在 肿瘤的发生、发展中起到重要的作用，且肿瘤相关基因启动子区的甲基化状态是一个高灵敏度 的肿瘤分子标志物。本试验采用MSP法对转化早期、前期、后期细胞中抑癌基因Pi6启动子的甲 基化状态进行检测。结果显示PJ继因在GMA诱导的16HBE细胞恶性转化不同阶段均出现甲基 化现象．而在转化后期溶剂对照及GMA组均出现不同程度的甲基化。 结果表明在转化早期及前期该基因的甲基化状态具有特异性，故可以考虑将其作为GMA 诱导16HBE细胞发生恶性转化的一个早期敏感指标，并为筛选接触GMA的高危人群，建立早 期的生物监测指标提供一定的线索。 多环芳烃化合物一DNA力．H合物生物标志物研究进展 郭旋 王正书 庞定国张伟徐培渝 四川大学华西公共卫生学院毒理学教研室成都61004l 目前认为外源化合物与DNA发生共价结合，形成的结合物一旦逃避自身的修复，就可能导 致某些特异位点的基因突变。因此，DNA加合物的形成被认为是致肿瘤过程的一个重要阶段。 它可以作为接触生物标志物，反映毒物到达靶位的内接触剂量；又可以作为一种效应标志物，反 映DNA受到有毒化学物质损伤的效应剂量。PAHs进入人体后代谢活化生成具有强致癌活性的 亲电子环氧化物，后者可与靶细胞DNA形成PAHs．DNA加合物，造成DNA损伤和染色体畸变。 本文综述了近年来有关PAHs——-DNA加合物的形成、立体异构效应和检测方法的研究进展。 研究表明，PAHs可以引起原癌基因ras的点突变，使之激活。Mizesko[q等研究发现早期暴露 于甲基胆葸诱导的Ki．ras基因突变的类型可能影响肺肿瘤的进展。同时PAHs可使抑癌基因p53 发生突变．这不但使野生型p53失去抑制肿瘤增殖的作用，而且突变本身又使该基因具备癌基因功 能。研究表明，苯并【a】芘在细胞色素P450酶的作用下可先生成(4-)-7，8．环氧苯并【a】芘，然后在环 氧化物水解酶(epoxidehydrolase，EH)的进一步作用下打开环氧键，生成(4-)-7，8．二醇苯并【a】芘， 而(士)-7，8．二醇苯并【a】芘则受到细胞色素P450酶的再次催化，生成最终的致癌物质(士)-顺式／反式 GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中P16基因甲基化状态 的研究 作者： 胡洁， 王全凯， 董琳， 王安娜， 谢广云， 孙金秀， 许建宁 作者单位： 胡洁,董琳,孙金秀(中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所, 北京 100050)， 王全凯 ,王安娜,谢广云,许建宁(中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所, 北京 100050 中国 疾病预防控制中心化学污染与健康安全重点实验室, 北京 100050) 引用本文格式：胡洁.王全凯.董琳.王安娜.谢广云.孙金秀.许建宁 GMA致人支气管上皮细胞恶性转化过程中P16基 因甲基化状态的研究[会议论文]