双水相萃取-磁性阳离子交换剂联用分离蛋白质.pdfVIP

HIAXUE) 第37卷 分析化学(FENXI 增刊 2009年lO月 ChineseJournal D135 ofAnalyticalChdnisay 双水相萃取一磁性阳离子交换剂联用分离蛋白质 盖青青1 张涛1屈锋’1张玉奎2 1(北京理工大学生命学院，北京100081) 2(中国科学院大连化学物理研究所，大连116023) 双水相萃取(ATPS)分离蛋白质是基于蛋白质在上下两相间分配系数不同而达到彼此分离，它是 一种简单、快速、低成本的蛋白质分离富集方法。表面修饰的磁性粒子与目标蛋白结合，在外加磁场 作用下快速与原溶液分离，可实现目标蛋白分离和富集。双水相萃取与磁性分离均具有简单快速、条 件温和的优点，在生物分离工程领域具有重要的应用价值。本文将双水相体系与热溶剂法制备的表面 羧基功能化的磁性阳离子交换剂联用，用于蛋白质的逐级分离。 考察了PEG．硫酸盐体系与磁性阳离子交换联用对5种标准蛋白细胞色素C(pI10．2)、溶菌酶 (pI11．2)、胰蛋白酶(pI10．8)、牛血清白蛋白(pI4．9)和肌红蛋白(pI7．0)以及对人血清蛋白分离 的影响。由图la和c可见，细胞色素C、牛血清白蛋白和肌红蛋白完全分配在下相，溶菌酶在下相的 分配多于上相，而胰蛋白酶则在上下相分配相同。溶液pH=7．2时，分别向上下相中加入磁性阳离子交 换剂。经磁性离子吸附后，下相中溶菌酶和细胞色素C的峰均消失，胰蛋白酶峰略有降低。而牛血清 白蛋白和肌红蛋白则几乎不被吸附，它们的色谱峰没有变化(图l11和b)。上相中的溶菌酶完全被吸 附，而胰蛋白酶吸附较少(图lc和d)。因此，上下相分别经磁性分离后，上相将溶菌酶与胰蛋白酶 分离。下相中的溶菌酶与细胞色素C均完全被吸附，胰蛋白酶有少量被吸附，牛血清白蛋白和肌红蛋 白不被吸附，故下相中含有牛血清白蛋白和肌红蛋白和部分胰蛋白酶。 4．8)约占人血清蛋白总量的50％，在 人血清中蛋白种类繁多，性质差异较大，其中白蛋白(pI pH=4．2时，将血清样品经磁性吸附后，主要的蛋白质峰高明显降低，由于白蛋白在此条件可被吸附到 磁性交换剂上，故溶液中去除了部分白蛋白。将磁性吸附后溶液再经双水相萃取，血清蛋白主要分布 在下相，其色谱峰明显。经双水相萃取后的血清样品的色谱峰明显高于未经双水相萃取的，说明经磁 性吸附后，双水相对剩余的血清蛋白有富集效果。 研究结果表明，双水相萃取与磁性离子交换剂分离结合，可根据蛋白质的分配系数差异和表面电 荷差异进行分离和富集。双水相萃取与磁性分离联用的方法简单快速，将其用于复杂生物样品中蛋白 质的逐级选择性分离，实现对特定高丰度蛋白的分离或低丰度蛋白的富集有待进一步研究。 7．5 10．0 12．5 I5．0 17．5 20．0 22．s t／min 图1双水相萃取／磁性分离蛋白质的色谱图 1．细胞色素；2．溶菌酶；3．胰蛋白酶；4牛血清白蛋白；5．肌红蛋白 本文系国家重点基础研究计划(No．2007CB914101)，国家自然科学基金(No资助 ‘E-mail：qufengqu@bit．edu．on 万方数据万方数据 双水相萃取-磁性阳离子交换剂联用分离蛋白质 作者： 盖青青， 张涛， 屈锋， 张玉奎 作者单位： 盖青青,张涛,屈锋(北京理工大学生命学院,北京,100081)， 张玉奎(中国科学院大连化学物 理研究所,大连,116023) 刊名： 分析化学 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMIST