人Id3重组腺毒的制备及对裸鼠致瘤作用影响的研究.pdfVIP

r㈣ ㈣删㈣mll 摘要 Y1 726苓芝苔‘ 摘要 分化抑制因子(inhibitor of DNA 一，对碱性HLH(bHLH)转录因子活性起负调控作用，主要功能是抑制细胞分化、 早期基因首先在小鼠成纤维细胞系中被发现，该分子参与多种细胞生物学过程，包 括淋巴细胞发育、骨骼肌分化、血管平滑肌增殖、胚胎的神经形成和肿瘤诱导的血 管发生等。 分子量约13000。Id3在肿瘤细胞中的表达及其与肿瘤恶性程度的关系目前尚未得到 一致性的结论。目前认为，Id3基因表达调控途径和机制的复杂性决定了其功能的 多样性，Id3蛋白对细胞周期的调控具有细胞种类和阶段特异性。因此，探讨作为 细胞调控蛋白的Id3分子在某些病理生理状态下的生理、生物学功能具有重要意义。 在前期研究中我们发现，Id3基因在人肺腺癌细胞株A549细胞中呈低表达水平，将 外源性Id3基因导入A549细胞过表达，可导致A549细胞生长抑制并诱导细胞凋亡。 胞，体内包装成重组腺病毒Ad．Id3，采用反复“感染．收集．冻融”法获取高滴度的 经逆转录．聚合酶链式反应(RT．PCR)和蛋白质印迹(Westernblot)法检测细胞内 Id3基因和蛋白的表达。结果显示，Id3基因成功克隆到腺病毒载体中，重组腺病毒 blot检 测到Id3蛋白在A549细胞中的高水平表达。 鼠皮下肺腺癌移植瘤模型，比较该移植瘤与无Id3基因导入的A549细胞对照组移 植瘤在小鼠体内生长的差异。每周观察一次小鼠皮下肿瘤生长情况，接种～个月后 处死小鼠，摘除皮下肿瘤，游标卡尺测量肿瘤大小。采用RT-PCR和免疫组化技术 摘要 检测各组肿瘤组织中Id3rn．RNA和蛋白表达的变化。结果发现，一个月后空白对照 组和Ad．LacZ对照组移植瘤体积分别为142．1 Ad．Id3组肿瘤组织内Id3mRNA条带灰度值比值明显高于空白对照组和Ad．LacZ对 的致瘤性生长，为研究腺病毒介导的Id3对基因治疗奠定了基础。 关键词：细胞分化抑制因子3(Id3)，A549细胞，腺病毒，转基因，裸鼠 Abstract InhibitorofdifferentiationisalsoknownasinhibitorofDNA binding，which inhibitscelldifferentiationand cell ofbasic promotesproliferation,isnegativeregulator factor．Therearefourrelatedmembersofthe helix—loop—helix(bHLH)typetranscription Id called andId4inmammaliancells．Id3Was identifiedas family Idl，Id2，Id3 originally aserum—inducibleimmediate inallestablishedmurinefibroblasticcellline．It earlygene invarious TandBcell participatedbiol