人ITSN2基新剪接异构体的克隆和鉴定.pdfVIP

摘 要 它们都有2个EH结构域、一个CC结构域和5个连续的SH3结构域， 通过选择性剪接具有2个主要的转录本。一个短的转录本S和一个在 C端依次增加了编码DH、PH和C2结构域的长转录本L。相对于ITSNl， ITSN2在组织表达中更有普遍性。研究表明ITSN主要在网格蛋白介 导的内吞过程中起到支架蛋白的作用。 TNFAIPI是一个受肿瘤坏死因子Q(TNFCt)诱导表达的即早基 因，为了研究TNFAIPI的相互作用蛋白，我们以TNFAIPI为诱饵蛋白， 使用酵母双杂交技术筛选人的胚胎脑库，结果筛选出了ITSN2基因的 一段，主要包含EH2和CC两个结构域。为了进一步研究它们之间的 相互作用，我们首先克隆了ITSN2。先克隆前、中、后三部分再连接 起来得到ITSN2全长，测序结果显示相对于ITSN2-L缺失了了17号 外显子和36号外显子的一部分。我们将这一新剪切体命名为 失后产生了一个终止密码子。因为17号外显子的缺失，位于中间的 CC结构域被破坏；而36号外显子缺失导致翻译终止，影响了PH和 C2结构域。说明这种不同于ITSN2一L的转录本，具有不同的结构域， 而与蛋白相互作用的结构域的改变可能使ITSN2-M结合不同的蛋白， 从而行使不同的功能。 我们用实验确定了在ITSN2-M中，17号外显子和36号外显子是 录成cDNA，以此为模板进行反转录PCR检测外显子缺失隋况，都有 原，注射兔子得到兔子抗EC的抗体。分别用细胞免疫荧光和Western 胞和人正常胚胎的脑、脑干组织中检测ITSN2蛋白的表达。其中 ITSN2-M在正常脑和脑干中表达很高，但是在神经母细胞瘤细胞系 SK—N—SH中表达量很低。这可能说明ITSN2一M在神经细胞中具有重要 的生理学作用和功能。 关键词：ITSN2基因；选择性剪切；剪切异构体；反转录PCR Ⅱ ABSTRACT membersof 1 and all The ITSN2，are family Intersectin，ITSN twoEH allcontain domains，one expressedproteins．They widely andfiveSH3 thealternative coiled-coildomain domains．Through two werea short majortranscripts．They produced splicing，they ofSandanadditionalCterminal increased transcript respectively,which structuraldomains．Incontrastto the Lof andC2 DH，PH longtranscript haveamore tissue ITSNl，ITSN2transcripts ubiquitousexpression major functionalcharacterizationhasrevealed