利用CreIoP系统删除转Bt基因水稻中的标记基因.pdfVIP

摘要 摘 要 水稻是我国第一大粮食作物。螟虫是影响水稻生产的主要害虫，每年造成的 产量损失达上千吨。培育抗虫害品种已成为水稻品种选育的重要目标。近年来， 植物基因工程为防治虫害开辟了新的途径，正逐步成为常规育种方法。 利用基因工程将抗虫基因引入植物的同时，通常会带入选择标记基因， 但 随着转化体的继代， 抗性选择基因不再需要，这些基因就成为“累赘”，并且 有可能会带来生物安全性问题。因此，培育无标记基因的转基因作物已成为植物 基因工程的发展方向。 “定向剔除”是一条可行的技术路径。来源于噬菌体P1 的Cre/loxP系统，是 当前植物遗传转化中应用较多，较为成熟的标记基因删除的系统。在这个系统中， Cre酶可以特异性的识别和切割位于两个lox位点之间的选择标记基因，整个重组 系统仅需Cre和lox识别位点即可完成，无需其它辅助因子的参加。 本研究主要结果概括如下： 1. 本文研究了水稻愈伤组织的培养、筛选条件：32℃光培养有利于愈伤诱导， 28℃暗培养筛选抗性愈伤，提高分化率。 2. 本 研 究 利 用 农 杆 菌 介 导 法 成 功 地 将 携 带 Cre 基 因 的 表 达 载 体 pCAMBIA1305.1Cre 导入安徽主栽水稻品种“皖粳 97 ”，PCR 扩增检测转化 植株中的目的基因，结果显示，外源基因已经成功整合到水稻基因组中。 3. 本研究使用了能定向切除标记基因的 Cre/loxP 定位重组系统。携带 Cre 基因 的 T0 代水稻植株（作为父本），与先期转基因育成的携带 loxp-hpt-loxp-bt 基因的“皖粳97”纯合系（作为母本）进行田间杂交，利用 Cre/loxP 系统定 向剔除标记基因。PCR 扩增检测杂交单株，结果显示，标记基因得到有效剔 除。 关键词 水稻；转基因植物；基因删除；Bt ；Cre/loxP 系统 I 利用 Cre/loxP 系统删除转 Bt 基因水稻中的标记基因 Abstract Rice is the major food crop in China. Borer is a key pest affecting rice production. Insect-resistant varieties of rice are an important breeding objective. In recent years, transgenic plants with insect-resistant gene have been widely popularized and applied. Transgenic technology in plant is becoming a means of conventional breeding. Marker genes are usually used to screen transgenic cells from non-transformed cells. But with the transformation of the subculture of plants, they are no longer required. It may result in potential bio-safety issues. Therefore it is of importance to set up an effective and practical genetic transformation system that without marker gene and to cultivate maker-free transgenic crops. “Directional removed”