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利用代谢工程构建高产番茄红素大肠杆菌 专业：微生物学 硕士生：翁志明 指导教师： 刘建忠教授 摘 要 番茄红素是迄今发现的各种类胡萝卜素中抗氧化性最强的一种，可以保护细 胞和组织免受自由基和单线性氧的损害，也可以增强人体的免疫反应。研究表明， 番茄红素和降低患动脉硬化症、冠心病以及包括肺癌、膀胱癌、宫颈癌、前列腺 癌和皮肤癌在内的各种癌症的风险存在一定的联系。因此，番茄红素在食品和药 品等领域具有重大的商业应用价值。近年来，利用微生物发酵法生产番茄红素成 为研究热点，特别是利用代谢工程实现了番茄红素在大肠杆菌中的异源表达，并 得到较高的产量。 本文利用代谢工程的方法构建了高产番茄红素的大肠杆菌工程菌：主要利用 基因敲除、过量表达相关的基因和选用合适的表达载体等手段来实现。发现使用 0．5％乙酸钾作为碳源发酵效果最好。 从七种大肠杆菌中选择BW25113作为基因敲除的起始菌，利用Red重组系 统分别对gdhA、fdhF和aceE这三个基因进行敲除，获得了4种不同基因敲除组 合的重组菌株。发酵结果表明，AgAa和AgAfAa这两种突变菌株最好。 提高了大约4倍。随后发现发酵培养基中使用国产细菌学蛋白胨比进口的胰蛋白 ／pAC316．WZM4R则能够产15mg／gDCW以上的番茄红素。 产量，但无法在AgAaT5／pAC316．WZM4R的基础上提高番茄红素产量。 crtI．crtB进行了随机突变，但均无法得到番茄红素产量提高的突变子。同时将 并在AgAaAp／pAC3 因替换为本实验室其他人获得的2个突变dxs，但均无法在2YP．KAe(0．5％)培 养基中提高番茄红素产量。 关键词：番茄红素，代谢工程，大肠杆菌 U Constructionof Escherichiacoilwith Engineered High．1evel of Production viaMetabolic Lyeopene Engineering Major：Microbiology Name：Zhirning Weng Liu Supervisor：Professor Jianzhong AB STRACT isoneofmorethan 700carotenoidsidentifiedinnatureandhas Lycopene been demonstratedtobethemost antioxidant／nvitro allthecarotenoids． potent among all roleinhumanhealth．Itcall Lycopeneplaysimportant cellsandtissues protect fromthe effectsoffree damaging