枯草杆菌Cob和NasF的重组表达及活性研究.pdfVIP

摘 要 尿卟啉原Ⅲ甲基化酶(s—adenosyl—Lmelllionine：I『r0呻y血log阻 mfI．在紫外 一个酶，SuMT过表达可以促进维生素B12的产量，大肠杆菌重组表达SI 灯下能观察到红色荧光，红色荧光物质是S唧催化过程的副产物，所以重组细胞 的荧光强弱可以反映S切垤T胞内催化活性。作为红色荧光蛋白，可用于胞内下游酶 活性的测定。细菌S切ⅥT的编码基因呈现遗传多样性，分别为∞M、co醐+矗册奶和 杆菌的cD醐+Jjl册国基因命名为刀鲫F。目前对枯草杆菌编码SIm仃的基因研究尚未 报道，本文分别研究了CobA和N雒F重组表达细胞的荧光强度差异和胞内催化活性， 取得如下结果： 1．克隆了枯草杆菌c0鲥和M妒基因，氨基酸序列比对结果显示朋妲基因中有∞M 结构域，也有|jlP柚结构域。 到红色荧光。 nm处有 3．CobA和NasF重组表达细胞破碎上清液紫外可见光谱扫描显示，在354 主要吸收峰，378 m有次级吸收峰；荧光光谱扫描显示，激发峰为357姗，发射 m。 峰为620 荧光强度高于C0bA。 mM 5．分析了不同浓度口TG对重组细胞荧光强度的影响。结果表明：口TG浓度为0．5 时为最佳诱导浓度，低于0．5mM荧光强度较低，而高于O．5m】M时荧光强度不再 增强，且对细胞有毒害作用。 6．外源添加不同浓度甜菜碱，分析对荧光强度的影响。结果表明：外源添加甜菜碱 对细菌的生长和荧光强度无明显促进作用。 别为28如和55kD。 综上所述，枯草杆菌CobA和N弱F都有过甲基化酶性质，NaSF重组表达细胞的 荧光强度高于CobA重组表达细胞，甜菜碱对重组细胞荧光强度无明显促进作用。 关键词：SuMT，枯草杆菌，∞鲥，阼觚R重组表达，活性 Abstract S-ad∞osyImel：hi伽血争d印end钮t a bm c：h a r01eintlle ofmodi矗ed c_bpointenzyme嘶hiplayskey biosynthesis te乜．ap”rolesby nuxt0 B12．Recombinant cc肛lpoundS跚c_h嬲s血)he锄龇Id、哇t锄iIle)【pression controllillg redfluorescence1lIlderUV red cdlsofSImn’inE∞矗c锄锄it li星虹i11umination．The nuoreScencesub8t缸cei8也e SInvrr nuorescence by-l，roduct丘Dmcatal舛cprocess，so caIl rcneCtSIM讪陋ccllular ofSUMT in细Si锣can catal如ca昧岫：ov*eXprcssion usedto do aredfluorescenCe