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高赖氨酸蛋白基对水稻的遗传转化
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7272
中文摘要……………………………………………………………………………………………V
英文摘要…………………………………………………………………………………………….VII
1;;I言……………………………………………………………………………………………………………………………….1
1.1研究的目的和意义……………………………………………………………………………l
1.2文献综述………………………………………………………………………………………2
‘’■-rrr’LII,r 1.2.1基因工程改良作物赖氨酸含量的研究进展……………………………………………。2
1.2.2无选择标记技术…………………………………………………………………………….5
1.3本论文的主要研究内容……………………………………………………………………。9
2材料与方法………………………………………………………………………………………lO
2.1植物表达载体的构建…………………………………………………………………………lO
2.1.1实验材料…………………………………………………………………………………lO
2.1.2实验方法…………………………………………………………………………………lO
2.2农杆菌介导法转化水稻…………………………………………………………………….13
2.2.1实验材料………………………………………………………………………………。13
2.2.2实验方法……………………………………………………………………………….14
2.3转高赖氨酸基因水稻植株的PCR检测…………………………………………………….15
2.3.1实验材料………………………………………………………………………………..15
2.3.2实验方法………………………………………………………………………………..15
2.4转高赖氨酸基因水稻植株的实时荧光定量PCR(Real.TimePCR)检测…………………16
2.4.1实验材料………………………………………………………………………………..16
2.4.2实验方法………………………………………………………………………………..16
8
2.5转高赖氨酸基因水稻植的赖氨酸水平分析……………………………………………….1
3结果与分析………………………………………………………………………………………19
3.1植物表达载体的构建……………………………………………………………………….19
3.1.1植物载体卡盒的构建…………………………………………………………………..19
3.】.2植物表达载体的构建…………………………………………………………………..26
3.1.3重组质粒导入根癌农杆菌……………………………………………………………。30
3.2农杆菌介导法转化水稻…………………………………………………………………….33
3.3转高赖氨酸基因水稻植株的分子检测…………………………………………………….34
3.3.1转高赖氨酸基因水稻植株的PCR检测………………………………………………..34
3.3.2转高赖氨酸基因水稻植株的实时荧光定量PCR(Real-TimePCR)检测…………….36
3.4转高赖氨酸基因水稻植株
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