糖化酶测定方法的研究.pdfVIP

维普资讯 幸廖化两 ， 墨度 曰灰立1 问 害 抗闸食 品科技 2000年第 3期 · 2l · 1 原 理 两 糖化酶 (即淀粉 一l，4一葡萄糖苷酶)有催化淀粉水解的作用，能从淀粉分子非还原性末端 。 嚣 、 开始，分解 a一1，4糖苷键生成葡萄糖 ，反应生成的葡萄糖用次碘酸盐法定量测定。 期 1．1 淀粉经糖化型淀粉酶糖化后 ，水解成含有醛基的葡萄糖，加入过量的瑛标准溶解和 氢氧化钠溶液后 ，葡萄糖被氧化成相应的酸 ： ● ● ／ (1)I2+2NaOH=NalO+NaI+ 0 、 (2) H_206+NaIO= H 0，+NaI 过量未作用的NalO ，在碱性条件下发生歧化反应： (3)3NaIO=NalO3+2NaI 1．2 加入硫酸，使 Na103和 NaI在酸性条件下发生氧化不原反应 ，析出过量 的碘 ： (4)NalO3+5NaI+3H2SO4=312+3Ha2SO,+3 0 1．3 析 出的碘用 Na2S20 标准溶液滴定之 ： (5)2Nds203+I2：NdS‘ +2NaI 从反应式 (2)知 ，反应中葡萄糖羧基上碳原子 的氧化数升高了 2，所 以葡萄糖的当量为： E葡萄糖： ：堡 =9005 ． ‘ 2 材料和方法 2．1 试剂和溶液 冰 乙酸 ，乙酸钠 ，硫代硫酸钠 ，碳酸钠 ，碘化钾，碘，氢氧化钠 ，硫酸和可溶性淀粉等。 2．2 仪器和设备 恒温水浴锅 ，秒表 ，比色管 (50m1)和滴定管 (25 )等。 2．3 分析步骤 2．3．1 待剩酶液的制备 精确称取酶粉 1．000克 ，倒入 50 烧杯 中，用少量 pH4．6的醋酸 一醋酸钠缓冲液溶液 ，并 用玻璃棒捣碎研磨，将上层液小心倾入适 当的容量瓶中，沉渣再加入少量缓冲藏 。此反复捣研 3—4次 ，最后全部移入容量瓶中，用缓j中液定容至刻度 ，播匀 ，用4层纱布或滤纸过滤供翻定 。 发酸液或浓缩液可直接吸取一定量的酶液于容量瓶中，用缓 j中液定容至刻度 。 2．3．2 测定 于 甲、乙两支比色管中(50m1)，分别加入2％可溶性淀粉溶液 25ml，及0．1moFlpH4．6_醋酸 一 醋酸钠缓冲液5ml，播匀，于40±0．2℃恒温水搭南中预热(5一l0分钟)。在甲譬中加入纛倒 维普资讯 扰州食