兽疫链球菌摇瓶发酵法生产透明质酸.pdfVIP

维普资讯 } 2)， 第 18卷第 3朝 无 锡 轻 工 大 学 学 报 Vo1．18，No 3 1999年 9月 JournalofWuxiUniversityofLightindustry Sep．．1999 文章编号 1999)03—0017-06 兽疫链球菌摇瓶发酵法生产透明质酸 高海军 ，陈 坚 管轶众 ，堵 国成 ，伦世仪 ～ 无锡磊擘生物工程学院，江苏无锡214036) 72 摘要 ：研究丁StreptococcuszooepidemicsH23摇瓶发酵生产透明质酸的条件 ，并对发酵机制进 行丁初步探讨．研究发现 ．H23在通风和厌氧条件下都能生产透明质酸．透明质酸的合成和菌 体生长是偶联的，对不同的碳瓿质量浓度显示 出不同的规律．酵母膏 、葡萄糖 是合适 的氯源和 碳源 ，初始质量浓度应分别为 2g／dL、4g／dL．Mg 对发酵有很大 的影响，MgSO ·7HO最 佳质量浓度 为0．2g／dL 摇瓶条件如温度 、通风等也影响透明质酸的形成 ，温度 33℃．摇瓶装 液量4OmL时最有利于透明质酸合成．在较适合 的条件下。透明质酸产量可 以达到0．47g／L， 产物对碳源的转化率为2．1 ． 关 键 词 透明质酸；摇瓶发酵{通风培养}压氧培养 二 再 中圉分类号l-石五 —— _A— — 。爱 透 明质酸 (hyaluronicacid，简称HA)是以p1—3糖苷键连接的N一乙酰氨基葡萄糖胺和 p1—4糖苷键连接的葡萄糖醛酸组成的二糖单体重复构成的杂多糖．它广泛存在于高等 动物的结缔组织 内，如关节滑液、玻璃样体液、脐带、皮肤、雄鸡冠等中．由于结构上的特点， 当它在水溶液中时 ，具有很高的粘弹性和极强的保水性．目前，HA 已被大量用于临床医疗， 如 “粘性手术”等．它的衍生物也可以作为药物缓释载体、组织修复药物等，在医学上有着广 阔的应用前景 ]．传统的获得 HA 的方法是动物组织提取法0]．但 自 1937年 Kendall 等H发现溶血性链球菌Streptococcushaemotyticus可 产生 HA后 ，陆续有人报道发现了 能产生 HA 的微生物菌种，此方面 已进行了大量的研究工作．1983年 日本资生堂成功地开 发出微生物发酵法生产的 HA口]．发酵法生产HA克服了提取法原料缺乏、工艺复杂的缺 点，降低 了HA 的生产成本 ，大大地推动了HA 的研究和应用．发酵法生产HA 的研究早 已 开展，但其报道多见于专利[5 ]，有关微生物较为详细的发酵机制和影响因素的研究报导却 很少．作者对一株链球菌进行了摇瓶发酵的初步研究 ，考察了影响发酵的几种因素，并对发 酵机制进行了初步的探讨． 1 材 料 与 万 法 1．1 菌种 实验菌种为StreptococcuszooepidemicsH23(实验室保藏号)． 收稿 日期 1998—09—08；恪订 日期 ：1999—0422 作者简介 ：高海军 (1969年 9月生)，男．江苏滨海人，博士研究生 l7 维普资讯 1．2 培养基 1．2．1 种子培养基 葡萄糖 20g／L，酵母膏 10g／L，牛 肉膏 10g／L，MgSOt·7H2O2g／ L，MnSO ‘·4H2O0．1g／L，KH2PO 2‘g／L，微量元素液 1mL／L，缓冲液 40ml／L，CaCO3 20g／L．其中，微量元素液 内含 (mg／L)：CaC122000，MnSO{·4H2O 24，ZnC1246，CuSO~． · 5H2O 19；缓冲液 内含(g／L)：Na2HPO ‘·12H2O 36．76，NaH2PO。·12H2O 15．98，NaH— C