PEG藻蓝蛋白亚基脂质体光动力学治疗乳腺癌的实验的研究.pdfVIP

摘 要 乳腺癌是世界上仅次于肺癌的发病率最高的恶性肿瘤，是第五大死亡性肿 瘤疾病。目前乳腺癌主要的治疗方法有手术、化疗、放疗和激素疗法。随着人 们传统观念的改变，既力求治愈，又保功能，而且美观，以上已不能完全满足 患者的要求。PDT 是通过光照光敏剂富集的组织，激发其发生光敏效应，产生 活性氧，从而破坏组织。PDT 是治疗体表肿瘤的一种新的疗法，临床上已经运 用其治疗乳腺癌和其他原发性恶性肿瘤并取得了良好的疗效。 藻蓝蛋白（Phycocyanin ，PC ）是螺旋藻中含有的一种重要的捕光色素蛋白, 由 [1] 开链四吡咯化合物和脱辅蛋白通过硫链键结合 ，由α 和β 两种亚基组成，天然 状态下以（αβ ）3 或者（αβ ）6 等杂聚体形式存在，α 和β 亚基的分子量分 别为 17KD 和 21KD[2] 。在中性条件，藻蓝蛋白在635nm 光激发下，其荧光发射 [3] 光谱峰位于 650nm 处 显示出红色的荧光。PC 是一种无毒副作用的理想光敏剂 [4] [7] 。黄蓓等 纯化出藻蓝蛋白的三个组分, 在浓度为 100μ g/ml，照射剂量 28.8 J/cm2 时，它们对肿瘤细胞的杀伤率达 69.2%~80.2% , 同时也证明，藻蓝蛋白的 [5] 酶解产物介导的 PDT 可以对小鼠移植瘤 S180 有 46~81% 的抑瘤率。谭阳 等发 现藻蓝蛋白的α ，β 亚基也具有很好的体外肿瘤细胞光敏效果。 由于藻蓝蛋白作为光敏剂应用有生物体内不稳定，靶向性不高等缺点，所 以要为藻蓝蛋白设计一种靶向制剂。目前常用脂质体来提高PDT 中光敏剂的靶 向性，一般来说，普通脂质体携带的光敏剂在肿瘤组织和普通组织中的分布并 无显著区别，肿瘤靶向性不很明显，相反的，经过特殊修饰的脂质体如长循环 [6] 脂质体有很好的肿瘤靶向性 。聚乙二醇修饰的脂质体能够逃脱网状内皮系统从 [7] 而提高脂质体在肿瘤组织中的含量 ，文献显示 photofrin PEG 脂质体提高了体 [8] 外实验的光毒性 。 本 实 验 采 用 薄 膜 水 合 — 超 声 分 散 法 制 备 藻 蓝 蛋 白 亚 基 脂 质 体 （PEG-PCS-LIP）， MTT 法检测藻蓝蛋白亚基脂质体对 MCF-7(人乳腺癌细胞)， MA-782 （鼠乳腺癌细胞）的光动力杀伤效果，流式细胞术（FCM）分析其对肿瘤 细胞周期的影响，吖啶橙染色观察细胞形态，确定 PEG-PCS-lip 的最佳作用时 间和浓度，通过细胞细胞周期和细胞形态的变化分析 PDT 作用的机理；乳腺癌 I 荷瘤小鼠尾静脉注射 10mg/kg PEG-PCS-LIP ，研究 PEG-PCS-LIP 在小鼠体内的各 组织的分布及代谢规律，摸索光动力治疗的最佳条件，为光动力学疗法治疗乳 腺癌小鼠研究提供基础参数。 结果显示： PEG-PCS-Lip 介导的 PDT 作用对乳腺癌细胞有良好的光动力疗 效，对 MCF-7 及 MA-782 细胞 IC50 （半数抑制浓度）分别为68μ g/mL、70μ g/mL。 FCM 的结果显示，当 PEG-PCS-lip 浓度为 50μ g/mL 时，肿瘤细胞凋亡率约为 30.5% 。对荷瘤小鼠的药代动力学实验显示，肿瘤组织中 PEG-PCS-LIP 的含量 大于其他组织，且与其他组织相比，PEG-PCS-LIP 在肿瘤组织中滞留的时间较长， 浓度较大。静脉注射 10~ 12 h 时 ，肿瘤中 PEG-PCS-LIP 浓度达最大值。对荷 瘤小鼠的 PDT 作用，当 PEG-PCS-LIP 浓度为 10mg/kg，光照剂量为