AY9944A-7和FSH对绵羊卵母细胞体外成熟的影响.pdfVIP

2015 第51卷 幕5期 R 。ducti0 andPt~ysi@ogy · 强 i黧 AY9944A一7和FSH对绵羊卵母细胞体外 成熟的影响 郝瑞荣 ，吕丽华 ，高俊杰 ，张春香 (1．山西农业大学动物科技学院，山西太谷 030801；2．山西农业大学园艺学院，山西太谷 030801) 摘 要 ：本试验 旨在研 究FSH和AY9944A一7在抑制剂 阻滞的绵羊卵母细胞体外成熟过程 中的诱导作用并探 究 二 者 的互作 效应 。分 别以次黄嘌呤 (Hx，4mmol／L)、3一异丁基一1一甲基黄 嘌呤 (IBMX，0．25mmo]fL)或 者二 丁酰 环磷酸腺苷 (dbcAMP，0．3mmobtL)抑制绵羊卵丘一卵母细胞复合体 (COCs)中卵母细胞 自发成熟，通过单独或 同时添加FsH(10 g／mL)和AY9944A一7(20 mol／L)诱导其恢复减数分裂 。结果表 明：FSH能克服一定浓度Hx， IBMX和dbcAMP对绵羊卵母 细胞 自发成熟的抑制作用 ，诱导绵羊卵母细胞生发泡破裂 ，排 出第一极体 ；AY9944 A一7能够克服一定浓度Hx和IBMX的抑制 ，诱导绵羊卵母细胞恢复减数分裂 ；FSH和AY9944A一7在克服Hx对绵 羊卵母细胞成熟 的抑制 时 ，存在显著 的协 同效应 (PO．05) 关键词 ：卵母细胞 ；AY9944A一7；FSH；体外成熟 ；绵羊 中图分类号 ：$826．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：0258—7033(2015)05—0025—04 在体 内，阻滞于第1次减数分裂早期的卵母细胞 够诱导Hx阻滞 的绵羊卵母细胞恢复减数分裂成熟 ， 如何恢复减数分裂引起研究者的重视 ，在排卵前促 并 已筛选 出在绵羊卵母细胞体外培养体系AY9944 性腺激素峰的刺激下卵母细胞减数分裂恢复 ，但是 A一7的适宜添加剂量为20Ixmol／LI。】。 由于卵母细胞本身没有促性腺激素受体…，促性腺 为了进一步明确FSH和AY9944A一7对于不 同抑 激素不能直接对卵母细胞作用，需要有一种阳性信 制剂的诱导作用以及FSH和AY9944A一7在诱导绵羊 号物质介导促性腺激素对于卵母细胞的诱导作用 。 卵母细胞体外成熟过程 中的互作效应 ，本试验分别 Byskov等_21从人的卵泡液 中分离并鉴定 出具有减数 以适宜浓度的次黄嘌呤(hypoxanthine，Hx)、3一异丁 分裂诱导活性的物质是甾醇类物质 ，并根据其来源 基一1一甲基黄嘌呤 (3一isobutyl一1一methylxanthine， 及作用命名为卵泡液促减数分裂 甾醇 (folliclefluid IBMX)及 二 丁 酰 环 磷 酸腺 苷 (dibutyrlcAMP， meiosis—activatingsterols，FF—MAS)，之后 的研究证 dbcAMP)作为抑制剂 ，维持卵母细胞减数分裂阻滞 ， 实 了FF—MAS的促减数分裂作用。但是由于FF—MAS 研究FSH和AY9944A一7在抑制剂阻滞的绵羊卵母细 是一种亲脂性物质 ，在水环境中溶解度极低 ，且FF— 胞体外成熟过程中的诱导作用及互作关系。 MAS还没有商品化，所 以使用FF—MAS合成的激动剂 1 材料与方法 来 间接研究FF—MAS的促减数分裂功效为研究者所 采纳。 1．1 试剂及配制 所用试剂除特殊说明外 ，均购 自 AY9944A一7通过抑制FF—MAS代谢 ，阻断胆 固 Sigma公 司 。AY9944A一7 (纯度大于99％)购 白 醇的合成 ，从而促进FF—MAS在生殖系统的累积。国 Calbiochem公司 ，TCM199和胎 牛血清 (FBS)购 自 内外的研 究表明，AY9944A一7能够促进FF—MAS的 Gibco公司。 积累 1，诱导体外培养的小