ⅰ群禽腺病毒分鉴定及重组蛋白elisa鉴别诊断方法的研究.pdf

I群禽腺病毒分离鉴定及重组蛋白ELISA鉴别诊断方法的研究 摘要 禽腺病毒(FALV)归为腺病毒科禽腺病毒属，根据抗原性差异，分为3 个群。I群禽腺病毒(Ⅳ帆)具有共同的群抗原，共12个血清型 (FAVl一FAVl2)，在鸡、鸭、鹅体内普遍存在，呈隐性感染，与其他病原共 同作用于家禽。2008—2010年从广西南宁市活禽市场采集259份样品，通过 选取不同年份的8株，进行血凝性、免疫琼脂扩散、形态学、致细胞病变 和鸡胚致病性试验。结果显示，8株均不凝集鸡红细胞，能与ⅣM阳性血 清反应，具有腺病毒粒子的典型特征，致细胞变圆、折光性增强，使鸡胚 均与ⅣM同源性最高。 发育不良。克隆8株hexon基因，经序列分析， 经遗传进化分析，均与ⅣM亲缘关系最近，结果表明，8株分离株为ⅣM。 根据GenBallk中ⅣⅣI 胞，经IPTG诱导，表明四种重组蛋白得到良好表达；经可溶性分析，表明 性的形式存在；经纯化，表明四种重组蛋白达到了较高的纯度和浓度；经 抗最适稀释度均为l：2000；一抗和二抗最适作用时间均分别为75miIl和 种ELISA方法检测野毒感染和灭活苗免疫血清各30份，结果表明两种血清 样品100份，阳性率分别为45％、41％、48％。为ⅣM抗体的检测和流行 病学调查提供简便、快速的血清学诊断方法。 以100K和33K非结构蛋白分别作为包被抗原，建立检测FALⅥ抗体的 为10．8呲和12．O呲；一抗血清最适稀释度均为1：100；酶标二抗最 两种方法具有良好的特异性、敏感性、重复性。以不同比例的100K、33K 高。用三种EUSA方法检测临床样品100份，阳性率分别为40％、35％、 42％。该方法可检出酣LⅥ野毒感染血清，而与灭活苗免疫血清无反应，为 该病的诊断与净化提供技术支撑。 U ANDDIFFERENTIAL ISOLATIo]N，IDENTⅢICATION D认GNOSISOFFOWLADENOVIRUSGROUPIBY RECOMBINANTPROTEINELISAM哐THOD ABSTRACT ’ Fowl adenoviI．uS(鲋Ⅳ)belon铲toAdenoVin峪￡珊ily C(舡嘶ns diVerse t11ree目．01upsaccordiI培toantigeIlici哆FowladenoVir嘴粤‘oup e)(istsiIl I(F埘I)h嬲congeflerousantig∞觚d铆elVesero呻es，锄d C：陆ckens， dllCb砒ld ill诧∞ed证recessivem甜mer甜ld witll geese，being wor妇培together 劬er iIlf瓠订．259 iIlliVe of patllogells s锄ples pou岫m打ketn删ngci够、Ⅳere colleCted舶m2008t0201 92isolationsare chick year O，锄d positiveby mteis isolations embD，osprolif．eration觚dPCKposi伽e 35．5％(92／259)．Eight arechosenf．romdi仔．erent of tobe yearspostiVes锄ples eVall．1ated伍rough