日本血吸虫不同育阶段虫体差异表达基因解析.pdf

摘 要 血吸虫病人兽共患，分布广泛，危害严重。上世纪90年代，巴西、中国的的科学家分别在 曼氏血吸虫和日本血吸虫的基因组测序及注释方面取得重要进展，获得大量有关血吸虫基因组一 般生物学意义的大量信息。本研究则针对血吸虫生活史复杂，其生长发育过程中虫体呈现显著的 生理学和形态学变化的特点，以在我国流行的日本血吸虫为对象，利用大规模、高通量的基因分 离分析技术，开展了不同发育阶段虫体差异表达基因分离、鉴定和解析研究，为从分子水平阐明 血吸虫生长发育及其与宿主相互作用的机制建立重要基础，为疫苗和药物研究开拓新途径。主要 研究结果概述如下： 一、日本血吸虫7d童虫消减cDNA文库的构建及测序分析 利用抑制性消减杂交(SSH)技术，以日本血吸虫7天童虫为实验组，42天成虫为驱动组， 首次构建了日本血吸虫早期童虫期别差异表达消减eDNA文库。获得的文库重组率为90％，大部 Coxidase)、 还原型辅酶脱氢酶(NADH 因子受体(Solublevascularendothelialcell factor growthreceptor)和IBIprotein基因在7天童虫和 42天成虫中的表达情况，结果显示，这些基因在童虫中的表达量均高于成虫。在日本血吸虫基因 这都说明本研究构建的童虫消减cDNA文库具有较高的质量。 index．htm)进行比对，结果显示，65％(1146条)的clusters与已知日本血吸虫基因组序列一致 (http：／／www．sanger．ac．uk／ProjectS／S 与NCBI的Nr数据库(http：／／WWWo 1条clusters 和数据库无任何同源性，提示他们可能是血吸虫特有的新基因。 其功能，但显示这些clusters都具有重要生物学意义。对所有功能明确的基因进行90分类，结果 显示，所占比例最大的三类分别为：代谢进程(Metabolic process)相关分子，占31％：调节生物 进程(Regulation ofbiologicalprocess)相关分子，占12％，胚胎发育(Embryonicdevelopment) acid 参与到糖酵解(Glycolysis)、氨基酸代谢(Amino acid Communication)、 metabolism)、嘌呤代谢(Purinemetabolism)等代谢途径和细胞通讯(Cell 泛素生物合成(Ubiquinonebiosynthesis)、尿素循环(Urea fixation)、蛋白酶 phosphorylation)、磷酸戊糖途径(Pentosephosphatepathway)、碳固定(Carbon mediated 体(Proteasome)、泛素调节的蛋白质降解(Ubiquitinproteolysis)等25条信号通路中。 vascularendothelial 本血吸虫在宿主血管内的生存极为重要的血管内皮细胞生长因子受体(soluble cell growthorreceptor)也在差异表达基因中出现。 二、日本血吸虫不同发育阶段差异表达基因研究 为分析日本血吸虫不同发育阶段差异表达基因状况，将5000个日本血吸虫eDNA克隆(4000 克隆)定制eDNA芯片，每个克隆在芯片上重复点样3次。以7d虫体eDNA为对照，分别和日本 通道杂交，每个阶段的样本做3次生物学重复。对每个基因杂交得到的9个杂交信号值(ratio 值)用SAM软件进行分析，假阳性率(FDR)控制在5％以内，再以2倍标准筛选差异表达基因。 7d虫体样本的自身杂交结果说明芯片平台可靠。再选择18个芯片杂交显示差异表达基因进行r