正交实验法优选女贞子多糖的提取工艺.docVIP

正交实验法优选女贞子多糖的提取工艺 　　[摘 要] 目的 优选女贞子多糖的提取工艺。方法 实验中对女贞子的多糖提取采用超声波提取法，并以具有实验次数少，数据点的分布很均匀，可用相应的极差分析法，方差分析法，回归分析法等对实验结果进行分析引出许多有价值结论的正交实验法，以多糖为评价性指标，用分光光度法进行测定。结果 实验通过超声提取女贞子多糖的方法获得了女贞子多糖的最佳工艺条件为80%功率下，料液比为1：40，提取时间20 min。结论 对提取率的影响最大的是料液比，其次是超升功率。超声提取使提取率提高了约1.4倍，该法值得应用和推广。 　　[关键词] 正交实验；女贞子多糖；超声波提取 　　女贞子始载于东汉《神农本草经》列为上品，应用历史悠久。《本草纲目》记载：此木凌冬青翠，有贞守之操，故以女贞状之……近时以放蜡虫，故俗称为蜡树[1]。《本草经疏》载：女贞子，气味俱阴，正入肾除热补精之要品，肾得补，则五脏自安，精神自足，百病去而身肥健矣。《本草述》载：女真实，固入血海益血，而和气以上荣……由肾主肺，并以淫精于上下，下独髭须为然也，即广嗣方中，多用之矣[2]。《本经逢原》载：女真，性禀纯阴，味偏寒滑脾胃虚人服之，往往减食作泻。可以看出女贞子的医用价值不可小觑，而学者们对于女贞子中齐墩果酸的药理研究比较多，近现代有研究显示女贞子多糖具有提高免疫、抗炎、抑菌等药理作用，为了给研究者提供方便，论文选择了对女贞子多糖进行提取研究。 　　1实验材料与仪器 　　1.1材料 女贞子果实采自于杭州，经鉴定为木犀科植物女贞。95%乙醇，三氯乙酸，重蒸酚，浓硫酸，盐酸，葡萄糖，30%过氧化氢，1，10-菲林试剂，邻苯三酚，三（羟甲基）氨基甲烷等均为分析纯。 　　1.2 主要仪器 超声波发生器（昆山市超声仪器有限公司 ），紫外可见分光光度计（日本岛津 ），旋转蒸发器（RE- 52B，上海亚荣生化仪器厂），低速大容量离心机（WTL，江苏金坛市金城国胜实验仪器厂），真空干燥箱（ DZF-6021，上海一恒科学仪器有限公司）。 　　2 实验方法 　　2.1 女贞子样品前处理 女贞子干燥成熟果实药材，去杂，用纯化水浸泡，沥干，于50 ℃烘箱中烘干，粉碎，过40目筛，保存在阴凉干燥处待实验备用。 　　2.2 多糖的测定方法 　　2.2.1 标准曲线的制备[3]：准确称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.1000g，定容于1000ml容量瓶中，再分别吸取0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，加水至1.00ml，加1.00ml5%苯酚和5.0ml浓硫酸，摇匀，静置15min，在490nm处测其吸光度，建立回归方程为Y=0.0986X-0.003，R2=0.9998。标准曲线如图2.1。 　　2.2.2 样品中多糖的测定：准确吸取样品液1.00ml按照标准曲线的步骤测定其吸光度，重复3次，根据回归方程计算溶液浓度，进而计算出多糖提取率。 　　2.3 女贞子多糖提取工艺路线 工艺线路：女贞子果实去杂浸泡→晾干粉碎过40目筛→取样称量→超声波提取→分离纯化→除蛋白→浓缩→乙醇沉淀→抽滤→称取浸膏→定容→标准曲线法定量分析[4]。 　　2.4 正交实验方案设计 对于超声波提取女贞子多糖的方法，经过综合考虑影响女贞子多糖提取效果的各因素，正交试验选取了主要影响因素（A：超声功率，B：料液比，C：提取时间，）进行研究。选取每一个因素的三个水平，按L9（3）4正交试验设计，对女贞子多糖进行提取实验。因素水平见表1。 　　2.5 制备工艺 取经“2.1”项处理好的女贞子2.0g，精密称定9份，分别按正交实验法进行实验。根据料液比关系女贞子粉末（g）：20%乙醇溶液（ml），如：女贞子粉1.0g对应20%乙醇溶液20ml于锥形瓶中进行超声浸取，静置，再用低速大容量离心机进行分离，提取液浓缩至原体积30%后，加入4倍体积的95%的乙醇沉淀，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮及乙醚洗涤，用蒸馏水复溶，用三氯乙酸法去除粗多糖中大量蛋白质后，再用 Sevag法去除少量的残留蛋白质，脱蛋白后的多糖液反复用95%乙醇沉淀，抽滤得到女贞子多糖浸膏，精密称定，计算浸膏得率。结果见表2。 　　2.6 样品含量测定 取所得浸膏样品，置于研钵中研细后，精密称取20mg，蒸馏水定容于100mL量瓶中。将超声波提取液按“2.2” 项多糖含量测定法进行测定。结果见表2。 　　3 结果与分析 　　3.1结果 在单因素影响女贞子多糖提取率的基础上，选取了超声功率，提取时间，料液比几个单因素，在温度60℃下，采用正交试验法确定超声提取多糖的优化工艺条件。实验结果如下： 　　由表2可以看出，各因素列的R值明显大于空列R值，说明各因素对女贞子中多糖的提取均有明显的影响，比较R