多重PCR检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性等位基因.pdfVIP

中国农业科学 2005, 38(4):826-830 Scientia Agricultura Sinica 多重PCR检测捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性等位基因 薄新文，李祥瑞 （南京农业大学动物医学院 南京 210095 ） 摘要：利用GenBank发表的捻转血矛线虫β微管蛋白基因组DNA序列设计2对引物，建立检测捻转血矛线 虫苯并咪唑类药物抗性的多重PCR方法，利用该方法检测我国不同地区捻转血矛线虫对苯并咪唑类药物的抗性， 并用生物学检测验证。结果表明，建立的多重 PCR 方法在抗性检测上具有很强的特异性，澳大利亚抗性虫株只 有 F1 和 F3 条带，上海敏感虫株只有 F2 和 F3 片段；序列分析证实抗性虫株编码β微管蛋白第 200 位氨基酸的 密码子为TAC，敏感虫株为TTC。并且该法具有很高的灵敏性，检测基因组DNA的最低量为50 ng。生物学检测， 澳大利亚抗性虫株丙硫苯咪唑LD -1 -1 达0.54 µg·ml ，上海敏感虫株的LD 为0.0023 μg·ml ，与多重PCR结果相 50 50 符，说明多重PCR可以用于捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性的检测。利用该技术检测源于新疆石河子、伊宁， 安徽五河，江苏南京、徐州等地的虫株发现，这些地理株均表现为敏感型，丙硫苯咪唑LD50 在0.0023～0.0032 µg·ml-1 之间，提示我国捻转血矛线虫苯并咪唑类药物抗性尚不严重。 关键词： 捻转血矛线虫；苯并咪唑类药物；抗药性；多重PCR Multiplex PCR Detection of Allele on Benzimidazole-Resistance or -Susceptibity in Natural Populations of Haemonchus contortus BO Xin-wen, LI Xiang-rui (College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095) Abstract: A multiplex PCR was developed to detect benzimidazole-resistance (BZ-R) or -susceptibility (BZ-S) in Haemonchus contortus by amplification with 4 primers of a sequence of the GRU-1 gene of β-tubulin of H. contortus making use of sequence information available in Genbank. The method was based on two allele-non-specific primers and two allele-specific primers. F1 (264 bp) and F3 (799 bp) should be produced in BZ-R ，F2 (585 bp) and F3 in BZ-S. With this method, it was found that H. contortus BZ-R strain from Australia showed F1 and F3, and the worm BZ-S strain from Shanghai did F2 and F3. Sequences analysis of the