甘蓝光敏色素B基因的克隆及在拟南芥中异源转基因的功能验证.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(22):4417-4427 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.22.003 甘蓝光敏色素B基因的克隆及在拟南芥中 异源转基因的功能验证 1,2 1,2 1,2 3 2,3 4 孙广华 ，原换换 ，樊晓聪 ，顾海科 ，宋梅芳 ，肖 阳 ， 2 2 1 1 1,2 孟凡华 ，郭 林 ，杨青华 ，詹克慧 ，杨建平 1 2 3 （河南农业大学农学院，郑州 450002 ； 中国农业科学院作物科学研究所，北京 100081 ； 北京市辐射中心，北京100875； 4 中国农业科学院研究生院，北京100081） 摘要：【目的】甘蓝（ Brassica oleracea L.）是世界上最广泛种植的蔬菜作物之一，其种植已由春、秋两 季种植转变为四季栽培，因此，研究甘蓝对光温的反应能力是品种改良的重要基础。光敏色素是植物最重要的一 类光受体，主要响应远红光和红光的变化，其中，光敏色素 B 是红光的最主要受体，与光形态建成、避荫性以及 生物产量等性状密切相关。克隆甘蓝的光敏色素 B 基因（BoPHYB ），在拟南芥中验证异源基因 BoPHYB 在光形态建 成和避荫性反应中的作用，丰富植物光敏色素基因功能研究，评价光敏色素在甘蓝品种改良中应用的潜在价值。 【方法】利用RT-PCR的方法克隆、测序验证得到甘蓝自交不亲和系12C 的BoPHYB 编码区cDNA序列；利用生物信 息学软件分析其编码的氨基酸序列及结构域，并与其他植物的光敏色素 B 进行序列比对，分析它们之间的同源关 系；构建其 35S 启动子驱动的植物表达载体 pJIM19-Myc-BoPHYB，通过农杆菌介导法转化拟南芥野生型 Col-0 和 phyB-9 突变体，并获得纯合转基因株系；比较 BoPHYB 与拟南芥光敏色素B（AtPHYB-GFP ）的转基因株系在不同光 质下的下胚轴伸长和成株期的表型，验证其在光形态建成和避荫性反应中的作用。【结果】从甘蓝中克隆了BoPHYB 的编码区 cDNA 序列，该基因编码区含有 3 507 个核苷酸，编码具有 1 168 个氨基酸残基、分子量为 128.9 kD 的 蛋白质；与拟南芥和白菜的phyB结构域类似，BophyB包含 1个GAF结构域、2个PAS结构域、1个HisKA 结构域 和1个HATPase_c结构域；氨基酸序列同源性分析发现，BophyB与拟南芥以及白菜的phyB同源性最高，与小麦、 玉米、水稻等单子叶植物的同源性较低；与 AtPHYB-GFP 类似，在红光和白光下不但Myc-BoPHYB 能互补phyB-9 极 端黄化的表型，而且转基因株系均表现为下胚轴加剧缩短；长日照和短日照下成株期转基因导致植株矮化、叶片 深绿和叶柄缩短。【结论】克隆了甘蓝光敏色素B基因，甘蓝光敏色素B与拟南芥和白菜的光敏色素B具有相似的 结构和功能，在红光和白光下促进幼苗的去黄化反应，在成株期显著抑制长日照和短日照下植株的避荫性反应。 关键词：甘蓝；拟南芥；光敏色素B；去黄化反应；避荫性 Molecular Cloning and Arabidopsis Ectopic Expression of a Phytochrome