甘蓝型油菜ADP-核糖基化因子基因全长cDNA克隆及表达分析.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(12):4008-4015 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.12.009 甘蓝型油菜ADP-核糖基化因子基因全长cDNA 克隆及表达分析 刘 薇，赵 云，安金玲，王茂林 （四川大学生命科学学院，成都 610064 ） 摘要： 【目的】克隆甘蓝型油菜（ Brassica napus L.）矮化突变体“NDF-1”和野生型近等基因系亲本“3529” 中ADP-核糖基化因子（ADP-ribosylation factor，ARF）基因全长cDNA，分析矮化突变体中该基因在不同组织中 的表达水平，探讨矮化突变体中该基因在甘蓝型油菜茎杆发育过程中的作用。【方法】采用 SSH（suppression subtractive hybridization）、RACE（rapid-amplification of cDNA ends）和RT-PCR技术，克隆甘蓝型油菜矮 化突变体“NDF-1”和野生型“3529”中的 ARF 基因的全长 cDNA 序列。分别采集甘蓝型油菜野生型和矮化突变型 苗期子叶、薹期根、茎尖和真叶，采用相对定量 PCR 方法检测矮化突变体中该基因的表达。【结果】获得了甘蓝 型油菜矮化突变体“NDF-1”和野生型“3529”的ARF基因的全长cDNA，分别命名为 BnARF 和 BnARF-h。序列分析 表明：这两个基因长度分别为837和802 bp，都含有546 bp的完整开放阅读框（ORF），编码181个氨基酸，与 其它植物、动物和酵母的 ARF 基因有很高的相似性。BnARF 基因在野生型和矮化突变体的根、子叶、茎尖和真叶 中均有表达，其中在子叶中表达量最高，真叶中次之，根和茎尖中的表达量最少。同时BnARF 在矮化突变体的根、 子叶和茎尖中的表达量都显著低于野生型，但在真叶中表达量相近。【结论】克隆了甘蓝型油菜矮化突变体“NDF-1” 和野生型“3529”中ADP-核糖基化因子基因的全长cDNA，这两个ARF基因的序列上有两处碱基存在差异，其中一 处是错义突变，推测这一突变可能与植株矮化有关。而 BnARF 基因在野生型和矮化突变体的根、子叶和茎尖的表 达存在显著性差异，可能参与了甘蓝型油菜的矮秆发育过程。 关键词：甘蓝型油菜；ADP-核糖基化作用因子；相对定量PCR；矮化突变 Full-length cDNA Cloning and Expression Analysis of ADP-ribosylation Factor in Brassica napus L. LIU Wei, ZHAO Yun, AN Jin-ling, WANG Mao-lin (College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610064) Abstract: 【Objective 】 This experiment was designated to clone the full-length cDNA of ADP-ribosylation factor (ARF) from the dwarf mutant NDF-1 and its wild type 3529 of Brassica napus L. and to analyze its expression in different organs, so as to study the relationship of ARF with the dwarfism in the dwarfing mutant. 【Method 】