甘蓝型油菜COI1的调控功能分析.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(10):1882-1891 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.10.002 甘蓝型油菜COI1的调控功能分析 王文静，杨小川，丁永强，尹国英，马浩然，张 洁，石小于，张鼎宇，李加纳，张洪博 （西南大学农学与生物科技学院/重庆市油菜工程技术研究中心，重庆 400716 ） 摘要： 【目的】研究甘蓝型油菜中茉莉素受体复合体核心成员CORONATINE INSENSITIVE 1（COI1）蛋白的基 因表达特性及生理调控功能。【方法】利用基因组数据分析甘蓝型油菜及其亲本种白菜和甘蓝基因组的COI1 构成 情况；使用定量和半定量RT-PCR扩增方法检测油菜 COI1 的组织特异性表达；克隆油菜 COI1 保守区片段，构建病 毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing，VIGS）载体，以农杆菌侵染方法培育 VIGS 诱导 COI1 沉默 的油菜植株，然后，用鉴定出的 COI1 沉默植株研究油菜COI1在育性调控及虫害抗性等方面的调控功能。【结果】 基因组数据分析表明，甘蓝型油菜亲本种白菜和甘蓝共有7个高度同源的 COI1，依序列同源性可分为4类：COI1a、 COI1b.1、COI1b.2 和 COI1c；甘蓝型油菜有 8 个 COI1，也由上述几类同源基因组成。半定量和定量 RT-PCR 扩增 试验表明甘蓝型油菜 COI1 在茎中的表达水平最低。从培育的 VIGS 诱导 COI1 沉默油菜中，共鉴定出 COI1 表达水 平被抑制超过 70%的株系 25 个，其中抑制效果最明显的 10 个株系被用于育性调控及蚜虫抗性试验。育性分析结 果证明，VIGS沉默 COI1 油菜的结实能力受到严重影响，其角果在授粉20 d以后的长度只达到对照油菜角果授粉 5 d后的长度，且角果中无正常种子；沉默 COI1 油菜的雄蕊长度短于相同花期的对照油菜雄蕊，其花药开裂延迟； 显微观察发现，沉默 COI1 油菜的花粉中有超过80%呈不正常形态。在相同处理条件下进行的蚜虫抗性比较试验中， 沉默 COI1 油菜叶片上的蚜虫数量超过对照油菜1倍多，而且有很多小蚜虫围绕大蚜虫的虫落，繁殖态势比对照油 菜叶片上的蚜虫旺盛。【结论】甘蓝型油菜 COI1 具有组织特异表达特性，沉默 COI1 会导致油菜雄性不育性状发 生，并降低油菜植株对蚜虫的抗性。 关键词：甘蓝型油菜；COI1；茉莉素；雄性不育；蚜虫抗性 Functional Analysis of COI1 Genes in Oilseed Rape （Brassica napus L. ） WANG Wen-jing, YANG Xiao-chuan, DING Yong-qiang, YIN Guo-ying, MA Hao-ran, ZHANG Jie, SHI Xiao-yu, ZHANG Ding-yu, LI Jia-na, ZHANG Hong-bo (College of Agronomy and Biotechnology, Southwest University/Chongqing Engineering Research Center for Rapeseed, Chongqing 400716) Abstract: 【Objective 】 CORONATINE INSENSITIVE 1 (COI1) is a critical component of jasmonate (JA) receptor complex. The objective of this study is to investigate the spatial expression pattern and regulatory roles of COI1 gene in