鱿鱼肝脏蛋白α葡萄糖苷酶抑制肽的制备及性质研究.pdf

Thesis for the Degree of Master Preparation and Characterization of α- glucosidase inhibitory peptide from squid liver protein Supervisor: Lu Hang Master Candidate: Wang Lin COLLEGE OF FOOD SCIENCE AND ENGINEERING DALIAN OCEAN UNIVERSITY DALIAN, LIAONING PROVINCE, CHINA JUNE 2015 摘要 摘要 本研究以鱿鱼肝脏为原料，提取鱿鱼肝脏蛋白，酶解制备鱿鱼肝脏活性肽， 从中分离纯化出具有α-葡萄糖苷酶（AG ）抑制作用的活性多肽，并对该组分的 稳定性、抑制动力学进行研究，具体研究结果如下： 1．鱿鱼肝脏蛋白质在6 种酶解体系下酶解，其中胃蛋白酶酶解产物具有最 高的α-葡萄糖苷酶抑制活性。对胃蛋白酶酶解鱿鱼肝脏蛋白制备AG 抑制肽的酶 解条件进行了优化，得出水解的最佳条件为：料液比0.4 %，酶与底物的质量比 3.0 %，体系pH 3.0，温度37 ℃，反应时间12 h ，此时酶解产物的半抑制浓度为 1.5 mg/mL。 2. 胃蛋白酶酶解产物依次经Sephadex LH-20 、DEAE-650M 阴离子交换柱、 PR-HPLC 分离纯化后，得到具有 AG 抑制活性的组分 A1 ，其半抑制浓度 IC50 为0.056 mg/mL，比原酶液活性提高了27 倍。 3. 对Sephadex LH-20 分离得到的具有最高AG 抑制活性的组分Ⅲ进行稳定 性和抑制动力学研究，发现组分Ⅲ具有很高的温度稳定性；pH 值5.0 到9.0 的范 围内对组分Ⅲ的抑制活性影响不太，抑制活性保留率为95 % 以上，但强酸强碱 条件下其抑制活性明显下降；并且组分Ⅲ在体外经过人工胃液和人工肠液的的处 理后，抑制活性保留率分别为90 %和80 %，表明大部分的抑制活性能得到保留； 该组分对α-葡萄糖苷酶为典型的非竞争性抑制作用。 关键词：鱿鱼肝脏蛋白；α-葡萄糖苷酶抑制肽；分离纯化；性质 I Abstract Abstract In this study, squid liver was used to produce proteins and bioactive peptides. The purpose of this study was to isolate bioactive peptide with α-glucosidase (AG) inhibitory activity from squid liver protein hydrolysis and the stability and inhibition kinetics of this fraction were also studied. The main contents and results are shown as following: 1. Squid liver proteins were hydrolyzed in six different enzymatic systems. The hydrolysate by pepsin treatment showed the highest α-glucosidase inhibitory activity. The hydrolyzation conditions on producing AG inhibitory peptide from s