鸭坦布苏病毒ral time rt-pcr监测方法的建立及跨种间传播的初步研究.pdf

AnhuiAgriculturalUniversity AnhuiAgriculturalUniversity AAnnhhuuiiAAggrriiccuullttuurraallUUnniivveerrssiittyy DissertationfortheMasterate DissertationfortheMasterate DDiisssseerrttaattiioonnffoorrtthheeMMaasstteerraattee EstabishmentofOneReal-timeRT-PCRAssayforDetectionof EstabishmentofOneReal-timeRT-PCRAssayforDetectionof EEssttaabbiisshhmmeennttooffOOnneeRReeaall--ttiimmeeRRTT--PPCCRRAAssssaayyffoorrDDeetteeccttiioonnooff DuckTembusuVirusInfectionsandPreliminaryStudyof DuckTembusuVirusInfectionsandPreliminaryStudyof DDuucckkTTeemmbbuussuuVViirruussIInnffeeccttiioonnssaannddPPrreelliimmiinnaarryySSttuuddyyooff InterspeciesTransmissionofDuckTembusuVirus InterspeciesTransmissionofDuckTembusuVirus IInntteerrssppeecciieessTTrraannssmmiissssiioonnooffDDuucckkTTeemmbbuussuuVViirruuss Candidate: LiuZhongliang Supervisor: Prof.Wei Jianzhong CooperantSupervirsor: Re.ZhuQiyun Academic Degree appliedfor: MasterofAgriculture Speciality: Preventative VeterinaryScience Researchfield: Infectiousdiseasesofdomestic animal College: Animal ScienceandTechnologycollege June,2013 摘 要 摘 要 摘摘 要要 自2010年4月以来，在我国东南地区省份的部分鸭场中先后爆发了一种急性传 染病，主要引起蛋鸭产蛋急剧下降。鸭群患病后4～5d左右产蛋率可从80%～85%迅 速下降至10%～30%，甚至停产；发病率60%～100%。临床剖检以卵巢变性、出血、 萎缩，肝脏有白色针尖状坏死等为典型病变。该病最初在江苏、浙江等地发生，之后 在河北、山东、安徽、福建、广东等省份的大部分鸭群中迅速蔓延开来，给我国养殖 业造成巨大的经济损失。经病毒分离及基因测序，现已确定该病原为鸭源坦布苏病毒 （DuckTembusu Virus，DTMUV）。 本研究为建立一种针对DTMUV 的快速、敏感、特异的Real-Time RT-PCR 诊断 方法，首先根据DTMUV 安徽分离株AH-10株E基因序列为模板（GenBank 登录号： JQ957513）设计特异性引物，将E基因全长克隆至具有T7 启动子的载体pBSK 上， 经测序无误后以该质粒为模板，在T7RNA 聚合酶作用下合成E 基因RNA 序列，将 该RNA 提纯后作为Real