鸭源巴氏杆菌、黄色葡萄球菌二联蜂胶疫苗的研制及其免疫应答反应的动态研究.pdf

摘 要 本研究选用从四川某养殖场分离的两株鸭金黄色葡萄球菌DSl2、DSl3和三株鸭 多杀性巴氏杆菌D22、D23和D157为制苗菌株，采用固体表面培养法，以蜂胶为免 疫佐剂，制备鸭巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌二联蜂胶灭活疫苗。该疫苗物理性状符合 疫苗制作的基本要求，经安全性检验证明其安全可靠；通过筛选确定了该疫苗的最佳 免疫剂量为5x109CFU／mL，0．5ml／只，4℃可保存12个月以上。 本研究建立了检测鸭金黄色葡萄球菌抗体和鸭巴氏杆菌抗体的间接ELISA方法， 体液免疫应答进行研究。采用鸭巴氏杆菌、葡萄球菌全菌裂解抗原为包被抗原，建立 方法。确定了金黄色葡萄球菌抗原最佳包被浓度：DSl2最佳包被浓度为5．5}tg／mL， 重复性好、特异性强。板内变异系数分别为1．71％-4．06％(金黄色葡萄球菌)、 度是微量凝集试验的50．100倍，包被巴氏杆菌抗原建立的间接ELISA方法的灵敏度 是微量凝集试验的50．100倍。 应用建立的ELISA方法对该疫苗的体液免疫应答进行研究。结果表明，注射了 和S．aureus共5株菌的抗体水平随着时间的延长逐渐升高，并在免疫后26d左右达到 抗体最高水平，然后逐渐下降，免疫后75d的抗体水平与免疫后两周的抗体水平相当。 且在免疫后的3-75d，一次免疫组的特异性抗体水平极显著高于生理盐水对照组 (Po．01)，二次免疫组的特异性抗体水平于一次免疫后9d开始显著高于一次免疫组 (Po．05)，于12．75d极显著高于一次免疫组(P0．01)。 攻毒保护试验结果表明，该疫苗对巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌同源菌株的攻击有 保护力，一次免疫后14d，对巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的保护率分别为90％和70％， 二次免疫后14d，对巴氏杆菌和金黄色葡萄球菌的保护率分别为100％和80％。 采用MTT比色法对T淋巴转化试验进行研究，试验结果表明，一次免疫组从免 疫后的3d起，鸭外周血T淋巴细胞对ConA的反应增强，明显高于对照组，到第9d 时达到峰值，然后迅速下降。二次免疫组于免疫后第9．12d时，鸭外周血T淋巴细胞 (PO．01)；免疫后26．33d，一次免疫组、二次免疫组和对照组，差异均不显著。 本研究表明，巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌二联蜂胶灭活疫苗安全、有效、无副作 用，能够刺激机体迅速产生细胞免疫和体液免疫应答。 关键词：巴氏杆菌金黄色葡萄球菌体液免疫细胞免疫 II ofinactivated of bivalentvaccine Development propolis Pasteurellamultocideand aureusandStudies Staphylococcus ■· l - ● 0nItS lmmUne dynamic resDonse Zheng Wei-wei(PreventiveVeterinaryMedicine) Directed Wen-can byJiang Abstract Theresearchwereselected aureusDS12andDS13whichwere Staphylococcus isolatedfromsickducksof duckfarmsinSichuanandPasteurellamultocideand D22，D23