TGF-βWlSP1通路在肺成纤维细胞异常增殖和胶原释放中的作用.pdfVIP

ONTIlE论著 TGF— ／WlSP1通路在肺成纤维细胞异常增殖 和，■■…l’H胶几…V原释放中的作用 赵 忻 杨明金 江德鹏 蒋幼凡 (重庆医科大学附属第二医院呼吸内科 400010) 【摘 要】 目的 探讨TGF—D／WISP1信号通路在肺成纤维细胞异常增殖及胶原释放中的作用及可能机制。方法 将体外培养 的HLF一1细胞随机分为5组 ：空白对照组 (生理盐水)，TGF—D干预组 (~ TGF-p因子处理 )，wISP一1干预组 (加入重纽人 wISP一1因子处理 )，TGF—D+SH一5组 (用SH一5预处理后再~A．TGF-D刺激细胞 )，TGF—p+抗wISP一1组 (联合使用抗wISP一1中 和抗体和TGF—p因子对细胞进行处理)。分别处理24h、48h、72h后通过MTT法检测各组细胞增殖情况，用 sircolcol1agen AssayKit试剂盒测定各组中可溶性胶原蛋白总含量，并通过Rea卜timePCR和Westernblot法检测各组样品中WISP一1的表达情 况 Western b1ot法检测Co11a1、Fnl、PI3K、p—Akt、p-GSK一3D水平。结果 TGF-p及WISP-1组细胞均明显增殖并释放大量 胶原蛋 白，而TGF—p+抗wISP1组其细胞增殖和胶原分泌则明显受抑；TGF—p处理组其PI3K、p—Akt、p-GSK3p、WISP一1水平明 显上调，而经sH一5干预后，p—Akt、p-6SK3p和wISP-1水平被明显抑制，而PI3K水平却未见明显变化。结论WISP1通过非经典的 TGF—p通路参与调节肺成纤维细胞异常活化 ，其机制可能为，TGF—p激活PI3K／Akt／GSK3p通路，进而诱导wISP一1分泌，促进 肺成纤维细胞的增殖和胶原释放。 【关键词】支气管哮喘；气道重塑；TGF-p；WISP-1；胶原沉积；肺成纤维细胞 TheRoleofTGF一3[／WISP1SignalinginCollagenReleaseandProliferationofHLF—l ZHAO Xin，YANG Ming—Jin，JIANG De—peng，JIANG You—fan (DepartmentofRespiratoryMedicine，TheSecondAffiliatedHospital，ChongqingMedicalUniversity， Chongqing400010，China) Abstract：ObjectiveToassesstheeffectofTGF一6／wisp一1signalingonproliferationandcollagenrelease of HLF一1．and investigate the probable molecular mechanism．Methods HLF一1were randomly divided into 5 groups： thecontrolgroup(saline)，theTGF—p—treatedgroup(TGF—D)，theWISP1一treatedgroup(wisP~)，theTGF—D+SH一5 group(TGF—D+SH一5)andtheTGF—p+anti-WISP1group(TGF—D+anti—WISP1)．Viablecel1sofHLF一1wereassessedby MTT after treatment for 24 h，48 h and 72 h．Collagen levels were determined using the Sircol Collagen Assay Kit． The 1eve1s of WISP1 mRNA in various groups were examined by Real—time PCR． Co11a1 Fn1， PI3K， P—Akt。 ， P—GSK