以cd抗原为靶的细胞系列纯化试剂盒的研制及初步应用.pdf

前言 细胞分离是基础医学和临床医学研究中常用的基本技术 之一，获得纯化的细胞对于深入研究细胞的发育和分化及生 物学效应具有重要的意义。早期的细胞纯化方法是根据细胞 的物理学和生物学性质如大小和密度进行分离，女NFicol卜 Hypaque和Percoll密度梯度离心法、离心淘洗法等，但收获 细胞纯度均不够理想； 用尼龙毛柱分离只能去除B细胞和单 核细胞。后来发展的利用细胞表面抗原与其抗体结合分离细 免疫磁珠法、免疫亲合柱法 胞的方法，如免疫Panning法、 及FACS法，分离效果大大提高。其中免疫亲合柱纯化法由于 分离效果可靠，操作简便易行等特点已在国外实验室受到较 为广泛的重视并获得初步临床应用。 该方法基本原理是先用生物素化单克隆抗体标记细胞， 然后利用Avidin—Biogel捕获被生物素化单抗标记的细胞．由 于利用Avidin_；}DBiotin之间特异而强烈的亲合作用，本方法 对靶细胞捕获能力强，特异性好，回收率高。所用介质对细 胞的非特异吸附低，易于去除非靶细胞。由于Biogel具有良 好的亲水性和柔性，因而对细胞的损伤作用小．整个分离过 程大约需要24,时。本方法处理量较大，分离规模易于放大。 由于柱子是通用的，只需更换不同的生物素标记抗CD抗原的 单抗，也可用于其他细胞的分离。本方法不需特殊设备，成 本低廉，操作方便，效果可靠。 Incorporate公 经过了十余年的发展，目前美国Celipro 司已有数种细胞纯化试剂盒供应，其资料显示，每支纯化柱 处理细胞量可达2×108或更高。利用CD34免疫亲合柱可从lOml CD34+细胞，纯度从纯化前的1．6％提高到 骨髓中获得1．43xi06 45．3％，回收率为47．4％：对脐血MNC进行分离，CD34+细胞纯度 由纯化前的1．02％提高到46．1％，回收率为43．6％。利用CD56免 疫亲合柱可将外周血中CD56十细胞从5．9％提高N85．8％，回收 率为19．3％。利用CD8免疫亲合柱可将外周血中CD8+细胞从 细胞纯化试剂盒也具有很好的纯化效果。 目前造血免疫细胞的发育、分化和调控仍然是实验血液 学、免疫学和发育学活跃的研究领域。进行这些研究的先决 条件就是分离出这些细胞。实验证明，经免疫亲合柱分离后， 造血干细胞体外扩增更加方便，扩增能力更强，移植效果更 好，有利于受体造血功能重建，对于临床造血干细胞移植具 有重要意义。其它几类免疫细胞在经免疫亲合柱纯化后，有 利于大规模体外扩增并进而用于肿瘤及病毒性疾病的过继细 胞免疫治疗。 本研究通过制备生物素标记单克隆抗体军NAvidin标记的 矛HCD34+细胞进行了纯化，其纯度和回收率接近或达到国外同 类产品的水平，国内尚未见类似的报导，应尽快推出国产系列 产品。 轴④舻∥ 地h多媾蜘敏托％纰 @ ④@ @ 丛{ 素台鼍化醢体境化车圭 亲台素 ＼挤压后收获 ∑ 合 非目标维胞 (CDa’l 。 厶篙又胞， 免疫亲合柱纯化细胞原理示意图 3 CHAM ( Kit Cell—SeparatingAssembly