三黄胶囊对消除病奈瑟氏菌r质粒的作用研究.pdfVIP

三黄胶囊对消除淋病奈瑟氏茵R质粒的作用研究 摘 要 目的：细菌质粒包括F因子(fertility factor)、Col因子(coliconogenicfactor)、Ti因子(tumorinducing 粒，R质粒上携带着耐药基因，赋予了细菌对某些抗生素的耐药性。近30年 来，国内外的一些研究者积极寻找一种有效的方法去消除耐药质粒，以逆 转细菌耐药。淋病是我国目前最常见的性传播疾病之一，随着抗生素的广 泛使用，淋病耐瑟氏菌的耐药性也越来越严重。大量研究发现淋病奈瑟氏 菌的耐药主要是由质粒介导。国内有用清热解毒类中药对G一杆菌进行质粒 消除的研究，这类中药正好是中医治疗淋病的方剂，我们可以推测中医治 疗淋病的基础与质粒消除有一定的联系。本实验拟在研究三黄胶囊是否对 淋病奈瑟氏菌R质粒有消除作用，以及随着三黄胶囊作用时间的延长能否 增强其消质效果。方法：1．淋病奈瑟氏菌质粒提取：选用10株2008年在 四川省皮肤性病研究所门诊病员分离经氧化酶试验及糖发酵试验鉴定的淋 病奈瑟氏菌，先将其在10个无选择的T-M培养基上复苏，24小时后将其 基上的淋病奈瑟氏菌于10个盛有iml生理盐水的Ep管中并标明编号，用 说明书的步骤提取质粒，提取完毕后将10株淋病奈瑟氏菌的质粒提取液分 而后在紫外透视光下观察质粒条带并做好记录。2．三黄胶囊亚抑菌浓度的 测定：将上述10株淋病奈瑟氏菌株复苏转种后用接种环分别刮取少许菌株 于10个盛有lml生理盐水的玻璃试管中将其混匀，并将其置于光密度仪中， 调整菌量和生理盐水量使其光密度为O．3，从而制备好了菌液浓度为10。／ml 的淋病奈瑟氏菌液。将菌液用接种器接种在含不同量(6．25ul、12．5ul、 皿的培养基的量为15m1)，24h后观察其生长情况，从而确定其亚抑菌浓度， 进而制备含亚抑菌浓度三黄胶囊混悬液的T—M培养基。3．淋病奈瑟氏菌质 粒消除实验：将上述10株淋病奈瑟氏菌再次按同样方法复苏、转种，于 24h后再次转种于含亚抑菌浓度三黄胶囊混悬液的T—M培养基中，分别作用 具体操作如下：将转种24h后的淋病奈瑟氏菌接种于含亚抑菌浓度三黄胶 囊混悬液的T-M培养基中培养24小时按照第一次提取质粒的方法提取其质 粒并电泳与消质前电泳结果作对比，此时将淋病奈瑟氏菌再次转种于含三 黄胶囊混悬液的T-M培养基中，24小时后按同样方法提取其质粒电泳与消 质前电泳结果作对比，此时将淋病奈瑟氏菌再次转种于含三黄胶囊混悬液 的T-M培养基中，24小时后提取质粒电泳与消质前结果对比。最后将经三 病奈瑟氏菌均生长良好，并且未受到污染。1．提取质粒的概况：10株淋病 耐瑟氏菌中9株可见较清晰的质粒带，其分子量均为7．4Kb即亚洲型PPNG 培养24h后观察到淋病奈瑟氏菌均能生长，因此将三黄胶囊的亚抑菌浓度 (即能使淋病奈瑟氏菌生长的最高药物浓度)，确定为200ul／培养皿，此 浓度的消质液即为实验所用的消质剂。3．10株淋病奈瑟氏菌在含三黄胶囊 病奈瑟氏菌的质粒电泳后观察其质粒带的情况(与消质前相比较)：作用 消质剂作用24h、48h的淋病奈瑟氏菌质粒阴转率与消质前淋病奈瑟氏菌质 阴转率与消质前淋病奈瑟氏菌质粒阴转率有显著差异性(PO．05)。经卡方 效果随着消质作用时间延长而愈明显。结论：三黄胶囊具有消质作用，其 消质效果随着时间的延长而愈明显，72小时消质率最高。 关键词：淋病奈瑟氏菌；质粒；三黄胶囊 R Neisseria The on toeliminate of studySanhuangcapsule plasmid gonorrhoeae includedtheFfactor(fertilityfactor)，R Abstract：objective-Bacterialplasmid factor(resistancefactor)，Colfactor(coliconogenicfactor)，Ti the of inducingplasmid)，hug