佐剂cpg-on与重组乙肝疫苗联合治疗乙肝病毒转基因小鼠的细胞免疫机制研究.pdfVIP

佐剂Op6一ODN与重组乙肝疫苗联合治疗乙肝病毒转基 因小鼠的细胞免疫机制研究 硕士研究生：李岩 指导教师：张卓然 教授 专业名称：临床检验诊断学 摘 要 目的： 病毒性肝炎是严重危害人类健康的常见传染病，全球约有 5亿慢性乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染者，并且与 肝硬化和肝细胞癌的发生密切相关。目前，尚缺乏有力的抗肝炎病毒 治疗药物。尽管近年干扰素和抗病毒核苷类药物不断有新的进展，但 疗效不尽人意。注射乙肝疫苗是目前预防和治疗乙型肝炎的主要方法， 但必须大剂量并且多次免疫才能产生效果。研究表明含有非甲基化CpG motif)的原核DNA可以刺激免疫系统并诱导其分泌产生免 基元(CpG 疫球蛋白及各种细胞因子。同时，合成的CpG寡核苷酸(CpG—ODN)还 可以通过Toll样受体一9直接激活多种免疫细胞，如B细胞、巨噬细胞、 树突细胞等。作为一种新型佐剂，CpG—ODN能够有效地增强机体抗原 特异性细胞免疫应答。同时，HBV转基因小鼠(HBVTg小鼠)的构建 在一定程度上模拟了人类慢性乙肝病毒感染状态，目前可作为一种人 类HBV慢性感染的动物模型。本文就对CpG—ODN作为佐剂对重组乙肝 疫苗诱导乙肝病毒转基因小鼠产生细胞免疫应答的机制进行研究。 方法：40只HBVTg小鼠随机分为四组，每组10只。分别由左后 肢腓肠肌或胫前肌注射生理盐水、rIFNQ一2b(2万IU／次)、重组乙肝 u u 疫苗(4“套／次)以及乙肝疫苗(4 g／O．5ml／次)+CpG—ODN(15 g／O．1ml／次)。免疫后采血，用流式细胞仪检测免疫小鼠的外周血T淋 IFN—Y的含量，MTT法和乳酸脱氢酶法分别检测免疫小鼠的淋巴细胞增 殖和杀伤功能。 结果：重组乙肝疫苗组CD3+、CD4’、CD8+细胞在T细胞中所占百分 特异性增殖和杀伤效应与对照组相比均有明显差异，(只O．05)。疫苗 ±162．155)pg／mL、(1 有明显差异，(只O．05)。淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应与疫苗组相 比均有明显差异，(尺0．05)。而干扰素组由于给药次数和剂量等原因， 与对照组无显著差异。 结论：1．CpG—ODN作为佐剂与乙肝疫苗联合免疫HBVTg小鼠后， T淋巴细胞以CD4+T细胞即Th细胞增加为主，且Th细胞百分率明显高 于疫苗组。 均明显高于疫苗组。 3．CpG—ODN联合重组乙肝疫苗免疫小鼠可以产生更强的HBV特异 性细胞应答，且以Thl型细胞免疫应答为主。 4．CpG一0DN作为佐剂可以较好的增强重组乙肝疫苗诱导HBV转基 因小鼠产生细胞免疫应答。 重组酵母乙肝疫苗 乙肝病毒转基因小鼠 关键词：CpG．ODN 细胞免疫应答 免疫治疗 ·2r Immune inHBV Mice ofCellular Transgenic Study Responses BVaccine Treated andRecombinant byCpG—ODN Hepatitis Postgraduate：Li—Yan Tutor：Zhang·zhuoran Laboratorial Diagnostics Speciality：C