转柽柳lea基烟草耐盐性分析.pdf

捅受 摘要 本研究是对转柽柳三以基因烟草当代和子一代的耐盐碱性进行研究，从而验证 ￡尉基因的功能，为通过基因工程手段培育抗逆植物提供基础资料，研究结果如 下： 在获得的41株卡那抗性植株中选取10株生长良好的转基因烟草进行分析， PCR检测检测全部为阳性，初步证明￡剧基因已经整合到烟草基因组中。对其中8 个转基因株系进行实时荧光定量PCR检测，证实了转入的外源基因均能够表达，但 ▲r- 各转基因株系外源基因的表达水平不尽相同，相对于内标基因GAPDH(甘油醛．3． 磷酸．脱氢酶)的表达水平为36．64～169．32之间。 对转基因烟草当代(To)10个株系分别进行了耐盐性研究，结果表明：转基因 烟草当代(To)组培苗在230mmol／LNaCl浓度下能够正常生长，在该浓度条件下， 培养20d后分别对转基因烟草及非转基因对照烟草的增重、生根及盐害指数等进行 调查。结果显示：10个转基因株系的生根率在40％～60％之间，而对照为30％；转 基因烟草各株系的增重高于对照的45．58％～79．08％；各转基因株系盐害指数平均值 盐性均高于非转基因对照烟草。 草的生根率、碱害指数、SOD活性、POD活性和相对电导率的变化进行调查，结果 持有10～30％左右生根率，而对照烟草受害程度较大，已经不能生根。且在此浓度 下，SOD活性．、POD活性均达到最大值，相对电导率的测定结果也表明各转基因株 系的NaHC03抗性均高于非转基因对照烟草。 将To代得到的转基因烟草种子(T1代)播种于含100mg·L。卡那霉素的l／2MS培养 0 基上培养5d后，对6个转基因株系的绿白苗之比进行统计，结果表明，转基因烟草 }》 I 、． 白苗比例是15．1，分离规律符合(24_1)：l。 选取Tl代的6个卡那霉素抗性株系进行PCR检测，检测结果全部为阳性，实 时荧光定量PCR检测结果显示：6个转基因株系三剧基因相对于内标基因GAPDH 的表达水平为132．17～242．88，证实了外源基因能够转录。 对转三剧基因烟草T1代的6个株系分别进行不同浓度NaCl胁迫处理，分析了 NaCl胁迫下转基因烟草的生长量、根系的发育及盐害程度。结果显示，各转基因烟 草Tl代组培苗在1 摘要 因对照的7．72倍，平均高生长是非转基因对照的3．51倍，盐害指数低于或等于 50％，而非转基因对照烟草Tl代组培苗生长缓慢、根系几乎不能生长发育，盐害指 数达65％，表明￡尉基因的导入同样提高了Tl代烟草的耐盐性。证明了外源￡捌 基因能够在转基因烟草中稳定遗传，柽柳￡尉基因的表达可提高烟草耐盐碱的能 力。 关键词 ￡觑基因；转基因烟草；实时荧光定量PCR；盐胁迫 - 爷， I Abstract Abstract wasobtained The上三“gene whichisa resistance f而m勋聊甜玩sp drought aJldsalt It loler