田建松生化报告课件.ppt

染色体不稳定性与肺癌 在恶性肿瘤发生发展过程中,众多的分子水平异常改变在癌变细胞内逐渐累积,构成细胞组织病理学改变的基础,在肿瘤中已确定的有两种改变类型: 1. 一种是核苷酸水平的错配修复基因突变导致的微卫星不稳定性(microsatellite instability, M IN) . 2.另一种则是染色体水平的异常改变,即染色体不稳定性( chromosome instability, CIN) . 由于绝大多数肿瘤特别是实体瘤细胞常表现为染色体不稳定性,所以我给大家讲一下有关CIN方面的问题. 要点: 一. CIN研究相关技术进展 二. CIN的在肺癌中的表现方式 三. 在肺癌中,导致CIN可能的分子机制 四. 前景展望 一. CIN研究相关技术进展 从荧光原位杂交(FISH) 方法到现在的DNA 纤维FISH ,染色体分析的相关技术已取得重要进展,其检测精度亦大大提高。染色体探针标记的种类已由原来的单色标记、双色标记发展为多色标记FISH 及光谱核型分析技术,不但可区分24 条染色体,还能同时检测染色体结构和数目的改变,并精确直观显示复杂的染色体核型, 从而成为CIN 研究的有力工具。双色探针削减杂交的演化,促成了比较基因组杂交(comparative genome hybridization , CGH) 技术的建立。 CGH 将等量待测和对照DNA 分别采用不同荧光标记后,共同与正常中期染色体杂交,通过2 种荧光素间的荧光密度值差异反映出待测组织基因组中染色体亚区的扩增或缺失。目前新技术微阵列CGH(array2CGH) 结合了DNA 芯片和CGH 两项技术优势,用DNA 微阵列代替了通常使用的正常中期染色体,直接分析被测组织(如肿瘤) 中已知或未知DNA 序列的相对拷贝数,成为一种自动化、高通量和高敏感性的CGH 方法。值得一提的是另一种基于CGH 的新方法,比较表达序列杂交(comparativeexpressed sequence hybridization , CESH) 技术,将待测与对照组织的RNA 进行逆转录后得到的cDNA 替代基因组DNA 去杂交,即可在染色体水平检测转录组的改变。 二. CIN的在肺癌中的表现方式 分类: CIN大致可分为数目改变和结构改变: (1)染色体数目的改变,即非整倍体,是指整条染色体的获得或丢失. (2)染色体结构的改变包括染色体的缺失、倒位、易位、重复、环状染色体、双着丝粒染色体等变异 (1)数目改变. 传统的核型分析表明几乎所有的肺癌都表现出复杂的核型,大约70%～80%的肺癌有三体型、四体型,并伴有染色体的缺失、易位和异染色质等各种结构的变异。染色体数目和结构的改变均有可能引起染色体成分的丢失。 (2)结构改变 杂合性缺失( loss of heterozygous， LOH) 分析发现肺癌中染色体缺失的发生率比核型分析和比较基因组分析检测到的要高的多。肺癌细胞常常出现多个染色体区域的缺失. 二.肺癌中CIN的表现方式 与某些血液肿瘤以易位为主的染色体变化不同,肺癌中存在多种克隆性细胞遗传学改变,包括染色体数目异常、片段的缺失和扩增等。其中(按发生频率排序) 3p 、4q、13q、5q、9p 、8p 、10q、1p 上遗传物质的缺失及19q、1q、3q、17q、20q、19p 、22q、7q 的扩增都是肺癌中常见的染色体改变。肺癌染色体改变与其组织分型相关。在非小细胞肺癌中, 最突出的改变包括1q21231 、3q262qter、5p13214 、8q232qter 等区域的扩增, 以及3p14221 、8p21223 、17p12213 等区域的缺失。其中部分区域改变还与不同的组织亚型及生物学表型有关 其中部分区域改变还与不同的组织亚型及生物学表型有关 .例如,高频率的3q22226 扩增和3p 的缺失为肺鳞癌区别于肺腺癌的特征之一。12p 扩增和2q 的缺失频率在肺鳞癌中均高于肺腺癌。1q22232 在肺腺癌中的扩增频率则高于肺鳞癌。同时,肺腺癌中20q13 扩增可能与肿瘤的侵袭性有关,而7q 和8q 的扩增很可能与肿瘤的恶性程度增高有关。小细胞肺癌中,在90 %的病例中发现3p 、5q、13q 缺失,在60 %～70 %病例中发现有4q、10q、16q 缺失和5p 、3q扩增。在非吸烟肺癌患者中,16p 扩增则成为最突出事件,表明不同致癌物所导致染色体区段的改变有可能不同 3 号染色体上遗传物质改变是肺癌中的突出事件,主要表现为3p 缺失和3q 扩增。现已证明3p的缺失是肺癌发生早期事件。到目前为止,被鉴定出的3 个较小区域包括3p21. 3、3p12 和3p25 。将array2C