煤焦沥青烟提取对BEAS-2B细胞Keap1-Nrf2ARE通路的影响.pdf

摘要 摘要 流行病学及动物实验证实煤焦沥青(CTP)具有致癌性，它所引起的肺癌已经 归于职业肿瘤。CTP成分复杂，致癌机制至今仍不清楚。 为抵御外界环境的侵扰，哺乳动物在进化过程中形成了一套复杂而严密的 信号机制，以及时打开或关闭内源性抗氧化系统，维持机体稳态，其中一个重 保护基因表达升高以应对氧化应激反应的主要通路，它主要通过调节NAD(P)H： 酶(GCL)和谷胱甘肽合成酶以及金属硫蛋白等多种抗氧化蛋白和酶来发挥抗 氧化作用。 目的 鉴于Keapl-Nr／2／ARE3嗵．路的重要作用，本课题拟采用煤焦沥青为受试物来探 讨该通路在BEAS．2B细胞中的作用机制，为肺癌的早期预防提供可行的策略和 靶标。 方法 1 煤焦沥青受试物的制各及其成分分析 中国铝业股份有限公司河南分公司(上街铝厂)中温CTP加热至400℃，粉尘 采样器收集其挥发烟气，二甲基亚砜(DMSO)溶解终产物，母液浓度为2 mg／ml； 气相色谱／质谱联用(GC．MS)技术检测CTP烟提取物成分。 2 细胞毒性实验 BEAS．2B细胞活性试验确定染毒浓度。不同染毒浓度作用24h后，台盼兰 计数活细胞。 3 基因与蛋白表达检测 Realtime h、6h、12h、24h PCR技术观察不同处理组作用BEAS．2B细胞3 blot技术观察不同染毒剂量作 后Nrl2，Keapl，ⅣQDJ基因表达情况；Western 用BEAS-2B细胞6 CTP h后Nrf2、Keapl、NQOI蛋白表达情况，并观察5pg／IIll h、6h、12h、24h后Nrf2蛋白表达情况。 作用BEAS．2B细胞3 4统计分析 I 摘要 SNK等方法分析，a=0．05为检验水准。 结果 1 煤焦沥青GC．MS成分分析 占91．O％以上。 2细胞毒性实验 数抑制浓度ICs0为8．1 1肛g／ml。 3 基因与蛋白表达情况 不同染毒剂量作用BEAS．2B细胞后各个基因mRNA相对表达量差别无统计 学意义，而作用不同时间点相对表达量差别有统计学意义。6lamol／L的全反式 维甲酸(ATRA)作用于BEAS．2B细胞，Nrf2mRNA相对表达量要高于各浓度 CTP烟提取物染毒组，而经6 ATRA预处理O．5h再给予5 CTP染 Imml／L I_tg／ml mRNA相对表达量却低于单独用5 毒BEAS-2B细胞后Artj7 pg枷CTP烟提取 物染毒，ⅣQDJ表达趋势与肭刀一致。 随着染毒浓度的增加，Keapl蛋白无明显变化，NQ01蛋白表达量逐渐上升； 5pg／ml染毒时Nrf2蛋白表达最高，此浓度时Nr￡2蛋白表达量随时间延长逐渐 升高，6h后达到最高，之后表达量又呈下降趋势。 结论 煤焦沥青烟提取物作用于BEAS．2B细胞后，代谢酶NQ01表达上调，推测 沥青毒性作用，降低细胞氧化损伤。 II Abstract Itisconfmnedthatcoal也lr pitch(CTP)iscarcinogenicbyepidemiological andanimal CanCercausedCTPhasbeendefmedas