煤焦沥青烟提取致支气管上皮细胞BEAS-2B染色体不稳定性研究.pdf

中文摘要 中文摘要 背景 tar 煤焦沥青(Coal pitch，CTP)是最早被发现的化学致癌物之一，它与职业 性肿瘤的发生密切相关，但其诱导肿瘤的发病机制仍不清楚。本文主要通过研 究煤焦沥青烟提取物诱导BEAS．2B细胞恶性转化过程中染色体变化，探讨染色 体不稳定性(Chmmosomal Instability,CIN)在癌变过程中的作用。 染色体不稳定性是指细胞在有丝分裂过程中丧失和(或)获得整条染色体 或染色体片段频率的升高。绝大多数肿瘤表现为染色体不稳定性，是恶性细胞 最显著的特征之一。 染色体不稳定性主要表现为数目和结构改变。染色体数目的改变，又叫非整 倍体，是指整条染色体的获得或丢失：染色体结构的改变包括染色体的缺失、扩 增、倒位、易位、环状染色体、双着丝粒染色体等改变。 染色体不稳定性的发生牵涉到细胞周期的各个环节。主要分为有丝分裂过 程中姊妹染色单体分离异常、中心体异常、纺锤体检测点功能缺陷以及端粒异 常等4大方面。 1． 姊妹染色单体分离及凝聚异常：DNA复制后，黏连素将2条染色单体包绕 在环中保证姊妹染色单体配对。当Seel亚基被分离酶(Separase)切开后，染色 单体就会很容易被释放出来。在细胞周期的大部分时间内，分离酶与保全素 (Securin)结合而其水解酶活性被抑制。在细胞周期中期到后期进行中，保全 素被降解，释放分离酶，降解黏连素，使姊妹染色单体分离。 2． 纺锤体检测点功能减弱：如果Mad或Bub基因突变或表达降低，细胞会忽 略纺锤体的损伤而继续分裂，从而形成异常核型。当检测到有未正确连接的动 粒时，检测点相关蛋白Mad2被激活从而抑制后期促进复合物APC／C的活性，使 保仝素不能被水解，从_17I』使姊妹单体不能分离。存肿瘤细胞中，纺锤体检测点功 能较其J下常组织明显减弱，并伴随高频率CIN。 3．中心体异常：中心体异常与非整倍体和CIN呈正相关，并在实体肿瘤中普遍 存在。中心体过表达存肺痛中很常见，并伴有明显不典型的形态、大小和数量异 常。中心体的复制过程受到严格地调控。CDK2／CyclinE复合物在中心体复制的 中文摘要 性米调控中心体复制，P53失活或表达量降低和CyclinE频繁地过度表达，将会 导致中心体扩增。P53与染色体不稳定／中心体扩增间存在正相关的关系。中心 体异常导致染色体彳i稳定，对肿瘤的发生产生深远的影响。 4．端粒、端粒酶异常：绝大部分肿瘤细胞的端粒缩短，端粒酶活性升高，以维 持细胞的永牛化。端粒缩短到一定程度将引起端粒末端的融合，引起“桥接．融 合．断裂”循环导致染色体不稳定，最终演化为肿瘤细胞的核型，产生癌变。TRFl 主要负责负性调节端粒的长度，控制端粒的延伸。TRF2主要负责保护染色体的 末端。TRF2丢失将会导致染色体末端失去保护，造成端粒3’端丢失和染色体末 端．末端融合。POTI的作用主要是保护端粒末端单链DNA并与调控端粒酶的活 性有关。 核型分析表明，几乎所有的肺癌都表现出复杂的核型，大约70％-80％的肺 癌具有三倍体、四倍体核型，并伴有染色体易位、缺失和异染色质等多种结构的 变异。染色体数目和结构的改变均可引起染色体基因成分的改变。 肿瘤细胞普遍存在的染色体不稳定性在肿瘤的发生、发展、演化过程中起 到何种作用，目前尚有争论。 本研究利用中温煤焦沥青烟提取物作为诱导剂，建立永生化人支气管．卜皮 细胞BEAS．2B的恶性转化模型，在确定细胞发生恶性转化的前提下，观察细胞 整个转化过程中不同时期染色体改变与细胞转化之间的关系，并对其可能的机 制从姊妹染色单体分离及凝聚异常、纺锤体检测点功能的减弱、中心体异常和 端粒、端粒酶异常等4个方面加以分析，以探讨煤焦沥青的致肺癌机制，为预 防煤焦沥青接触者罹患职业性肺部肿瘤提供理论依据。 研究目的 分析煤焦沥青丰成分，建立人支气管上皮细胞BEAS．2B的恶性转化模型； 观察不同时期细胞的染色体不稳定性与细胞恶性转化之间的关系； 从姊妹染色单体分离及凝聚异常、纺锤体检测点功能的减弱、中心体异常 和端粒、端粒酶异常等4个方面分析染色体不稳性的机制，探讨煤焦沥青的致 肺癌机制，为预防煤焦沥青接触者罹患职业性肺部肿瘤提