白藜芦醇对3T-L1前脂肪细胞凋亡与分化的影响及机制研究.pdfVIP

中山大学硕士论文 白藜芦醇对3T3．L1前脂肪细胞凋亡与分化的影响及机制研究 白藜芦醇对3T3-L1前脂肪细胞凋亡 与分化的影响及机制研究 专 业：营养与食品卫生学 硕士研究生：陈思凡 导 师：冯翔副教授 中山大学公共卫生学院 中文摘要 随着经济的发展，人们生活水平的提高，在现代社会肥胖己成流行趋势，在 大多数国家肥胖的发生率都在持续增长。肥胖发生的原因主要是由于机体摄入过 多的能量，同时也缺乏体育锻炼，进而导致过多的能量以甘油三酯(Triacylglycerol， TG)的形式储存在脂肪细胞中。脂肪组织在人体中是一个重要的能量稳态调节 器，脂肪蓄积过多可能导致胰岛素抵抗，这是包括2型糖尿病、高脂血症、动脉 粥样硬化和高血压病等代谢综合征发病的“共同土壤”。机体的脂肪含量是由脂肪 细胞的体积和数目决定的。在分化成熟的脂肪细胞中，增加TG储存可以导致细 胞体积的增大，而脂肪细胞数目的增加则是由于前脂肪细胞过度增殖及分化造成 的。因此，减少机体脂肪含量的方法包括降低脂肪细胞内脂肪含量(通过影响脂 肪合成或脂肪分解)，或抑制前脂肪细胞向脂肪细胞分化，或促进前脂肪细胞和 脂肪细胞的凋亡。传统的减肥方法主要是减少能量摄入和增加体育锻炼而降低脂 肪细胞内的脂肪含量，而传统方法减肥成功者只是脂肪细胞变小而数量不变，这 些方法获得的体重减轻往往难于长期持续，甚至可能出现体重反弹，因此，能否 通过其它更好的途径来防治肥胖成为我们关注的焦点。 中山大学硕士论文 自藜芦醇对3T3一L1前脂肪细胞凋亡与分化的影响及机制研究 stem 脂肪细胞起源于骨髓间充质干细胞(Mesenchymalcells，MSCs)，经过 亡，完成整个生命周期。在脂肪细胞的生命周期中，MSCs首先形成为前脂肪细 胞，前脂肪细胞经过生长抑制、克隆性增殖和一系列基因表达的变化，细胞内脂 滴逐渐增加，进而形成成熟脂肪细胞。在脂肪分化过程中，过氧化物增殖体激活 受体讯PP—～R丫)和CCAAT／增强子结合蛋仨I(C／EBP)是调节脂肪形成最主要的转录 因子。脂肪细胞在生命周期的后期进入凋亡阶段，细胞凋亡是维持细胞稳态和更 新的程序性死亡过程。凋亡的启动和信号传导机制比较复杂，主要是通过死亡受 体途径(Death 在前脂肪细胞和脂肪细胞的凋亡过程中起关键作用。外界因素作用于细胞信号分 子，引起线粒体膜电位的改变，细胞色素C释放增加，激活Caspase依赖的级联 反应，从而引发细胞凋亡。在脂肪细胞的整个生命周期中，调节前脂肪细胞的分 化，诱导前脂肪细胞或成熟脂肪细胞的凋亡，这对于减少脂肪细胞数目和体内脂 肪储存具有重要意义。 大量研究显示，植物化学活性物质对于肥胖具有防治作用。白藜芦醇 生、葡萄酒和其它天然植物或果实当中，具有广泛的药理学效应。Res的生物学 效应包括抗炎症、抗氧化、抗白血病、神经保护作用，同时可作为肿瘤化学治疗 和化学预防的药物。在多种类型的肿瘤细胞中，Res可促进细胞周期阻滞、抑制 细胞增殖并且诱导细胞凋亡。而且有研究发现，Res可抑制前脂肪细胞分化过程 中脂肪的合成，并且可促进分化成熟脂肪细胞的凋亡。然而，Res对于前脂肪细 胞增殖、分化及凋亡的影响及相关机制仍未明确。我们推测Res可能影响脂肪细 胞生命周期各阶段，从而对肥胖及代谢综合征有预防和治疗作用。 目的 l、研究并探讨Res对前脂肪细胞的凋亡作用及可能机制 2、研究并探讨Res对前脂肪细胞分化的抑制作用及可能机制 lI 中山大学硕士论文 白藜芦醇对3T3．LI前脂肪细胞凋亡与分化的影响及机制研究 方法 1、Res对前脂肪细胞的凋亡作用 (1)培养3T3．L1前脂肪细胞，用WST-I染色法测定Res对细胞增殖的影响， 通过LDH漏出率实验评价Res对细胞膜的损伤作用。用Hoechst33258染色细胞 核，在荧光显微镜下观察Res对细胞核的作用，在透射电子显微镜下观察Res 对细胞凋亡超微结构的改变。用流式细胞仪测定药物作用后细胞周期、线粒体膜 电位、细胞凋亡率的改变。 镜下