真核肽链释放因3b(eRF3b)多克隆抗体制备及其在HBV感染肝硬化中诊断价值的初步研究.pdf

l IIHIIII／IlIlIIIlUl 14III It Ill Y1901364 目 录 中文摘要……………………………………………………………………．．1 英文摘要……………………………………………………………………．．5 英文缩写……………………………………………………………………10 研究论文真核肽链释放因子3b(eRF3b)多克隆抗体制备 及其在HBV感染肝硬化中诊断价值的初步研究 前言……………………………………………………………………11日U吾…………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………12 结果……………………………………………………………………26 附图……………………………………………………………………31 附表……………………………………………………………………41 讨{念……………………………………………………………………43 结论…………………………………．：………………………………．48 参考文献………………………………………………………………49 综述Des一丫一carboxy 分析…………………………………………………………………53 致谢…………………………………………………………………………94 个人简历……………………………………………………………………95 中文摘要 真核肽链释放因子3b(eRF3b)多克隆抗体制备 及其在HBV感染肝硬化中诊断价值的初步研究 摘 要 目的：乙型肝炎病毒(皿V)感染是全球面临的一项重大公共卫生 但是从慢性乙型肝炎、肝硬化发展为肝癌需要经过很多年，如果我们能对 这些高危人群进行定期监测，早期发现、诊断，就能及时进行治疗，从而 延长患者寿命。但是由于现有的诊断技术包括一些血清标志物其早期诊断 效果不佳，灵敏度、特异度不高，从而造成了病情的延误，因此需要寻找 更为灵敏的，诊断准确度更高的标志物，为临床决策提供帮助。 本室前期通过乙肝及其相关疾病蛋白质组学的研究，利用飞行质谱技 术，发现一个多肽片段4210Da，在慢性乙肝及其相关疾病不同病程中的 1 含量存在显著性差异。经质谱鉴定，420Da是真核肽链释放因子eRF3b 裂解后的一部分，因此设想eRF3b蛋白在乙肝及其相关疾病中是否也存 在差异。 由于目前市场上没有eRF3b蛋白含量检测试剂盒，因此本研究自行 08．21 制备了针对eRF3b氨基端第15位氨基酸的兔多克隆抗体和大鼠多克 隆抗体，由于这段多肽含有l10个氨基酸，因此称其为eRF3b．110，编码 其相关疾病中的诊断价值，为临床大规模的病例对照研究奠定基础。 方法： 行重组质粒PCR鉴定及测序分析。 中文摘要 GST．eRF3b．1 SefinoseTMResin纯 溶性。大量表达GST．eRF3b．11O融合蛋白，通过GST SefinoseTMResin GST．eRF3b．110融合蛋白纯化情况。通过凝血酶在GST 10融合蛋白，进行1 柱上酶切、GST．eRF3b．1 8％SDS．PAGE检测 谱鉴定。 疫新西兰大白兔，用GST．eI