真核肽链释放因eRF3agspt1对大鼠肝纤维化模型的作用.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………5 研究论文 真核肽链释放因子eRF3a／gsptl对大鼠肝纤维化模型的作用 前言……………………………………………………………………10日U舌……………………………………………………………………1 材料与方法……………………………………………………………11 结果……………………………………………………………………20 附图……………………………………………………………………23 附表………………………………………………．．…………………．30 讨论……………………………………………………………………34 结论……………………………………………………………………35 参考文献………………………………………………………………35 综述肝脏疾病中细胞凋亡的机制及其生物标志物……………………39 致谢…………………………………………………………………………49 个人简历……………………………………………………………………50 中文摘要 真核肽链释放因子eRF3a／gsptI对大鼠肝纤维化模型的作用 摘 要 目的：我国慢性肝病中主要以慢性乙型肝炎最多，由于肝炎病毒复制， 病毒刺激机体的免疫防御系统，导致免疫防御系统的淋巴细胞在清除病毒 时，“误伤肝细胞，产生肝脏内炎症，从而诱导了纤维组织过度增生，致 使肝纤维化。肝纤维化的病理改变主要是细胞外基质过度沉积在肝脏中， 大多数慢性肝病有不同程度的肝纤维化，这是一种常见的病理基础，表现 为肝细胞胶原蛋白等细胞外基质合成增加，降解相对不足，从而使细胞外 基质过度沉积在肝脏中。如果进一步发展则会引起肝小叶改建，假小叶结 节形成，其中25％40％最终发展成肝硬化和肝癌。因此，在治疗慢性肝 病时阻断肝纤维化已成为一个关键的问题。肝纤维化是多种慢性肝病发展 至肝硬化共同的病理基础，而目前常规肝功能检查只能反映肝脏功能，无 法测知肝纤维化程度。依据肝穿刺活体组织检查，也难以对肝纤维化进行 动态观察及疗效评估。 真核肽链释放因子是在真核生物中参与细胞内蛋白质合成终止过程 中新生肽链释放的一组重要的蛋白质，包括两类，即eRFl和eRF3。有研 究显示，eRF3a／gsptl是哺乳动物翻译终止过程中的主要因子，它的表达 水平影响eRFl蛋白的稳定性，并且决定着终止复合物的形成，因此我们 的表达水平是否对肝纤维化产生影响。 方法： l 粒，进行双酶切鉴定及测序分析。 2肝纤维化模型建立。100只SD大鼠腹腔内注射5％四氯化碳与橄榄 油的混合物，剂量为5ml／kg，每周两次，注射8周。造模过程动物饲水中 加入25mg／L的苯巴比妥。正常对照组大鼠14只，按模型建立组的同样程 序腹腔内注射橄榄油8周。模型大鼠CCL4处理四周之后分别用构建的重组 质粒处理、秋水仙碱阳性对照处理，其中质粒处理组分为5个亚组： 中文摘要 1)、 CCL4+eGFP．C2-gsptl质粒 2)、 3)、 4)、 CCL4+eGFP。C2-gsptl质粒0mg／kg每周一次组(模型组)，每组12只大鼠， 经尾静脉快速注射质粒；阳性对照组为秋水仙碱，共14只，0．14mg／kg灌 次组，共12只大鼠。观察重组质粒对肝纤维化的治疗作用。 3肝功能检测。留取血清，使用微板法检测AST、ALT等肝功指标变 化情况。 4肝组织病理检测。第8周实验结束后，提取大鼠肝组织，进行石蜡 la 包埋，分别行厚度5 rn的连续切片，之后进行HE染色和免疫组织化学染 色，镜下观察肝组织病理变化。