生物化学第四章酶资料.ppt

（2）ATCase活性调节的机理 有催化活性的构象 无催化活性的构象 （六）别构酶调节酶活性的机理 1、对称或协同模型（symmetry or concerted model,也称齐变模型、MWC模型） 1965年由Monod、Wyman和Changeux提出。 该模型的要点 : 2、序变模型（sequential model，也称KNF模型） 1966年由Koshland、Nemethy和Filmer提出。 该模型的要点 : 八、酶的活力测定 p335 1．选材 2．破碎细胞 3．抽提 4．去核酸、去多糖 5．提纯 6．保存 （一） 酶的制备 由于酶的特殊性，在提纯过程中要注意 : 1．全部操作在低温0～4℃。 2．在分离提纯过程中，不能剧烈搅拌。 3．在提纯溶剂中加一些保护剂，如少量EDTA、 少量β-巯基乙醇。 4．在分离提纯过程中要不断测定酶活力和蛋白质浓 度，从而求得比活力，还要计算总活力。 （二）酶活力的测定 p338 酶活力（enzyme activity, 也称酶活性） 酶活力的测定 1．测定酶活力时应注意几点 （1）应测反应初速度（initial velocity or initial speed） （2）酶的反应速度一般用单位时间 内产物的增加量来表示。 （3）测酶活力时应使反应温度、pH、离子 强度和底物浓度等因素保持恒定。 （4）测定酶反应速度时，应使[S][E]。 产 物 浓 度 [P] (t) 2．酶活力和比活力表示方式 （1）酶活力（enzyme activity） 酶活力的定义 酶活力的大小用酶活力单位来表示，简称酶单位（unit, U） 酶单位的定义 1961年国际酶单位（IU） 1972年Katal（简称Kat）单位 习惯上沿用的单位如 : 乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶的活力可用丙酮酸的增加量表示，也可用340nm光吸收的增加量来表示。 （2）酶的比活力（specific activity，也称比活性） 比活力：指每mg蛋白质所具有的酶活力，一般用 U/mg蛋白质来表示，比活力说明酶的纯度。 比活力= 酶活力（U/ml）/蛋白质浓度（mg/ml） 比活力有时也可用每g或每ml酶含多少个活力单位来表示。 （4）分子活性（molecular activity） （5）催化中心活性（catalytic center activity） 在最适底物浓度时，每分钟或每秒钟每分子酶 转换底物的分子数。 （3）转换数（TN or kcat) 在最适底物浓度时，每分钟每分子酶转换底物的分子数。 每分钟每一个催化中心所转换底物的分子数。 3. 酶活力的测定方法 P337 分光光度法（spectrophotometry） 该法要求酶的底物和产物在紫外或可见光部分光吸收不同。 简便、迅速、准确。 一个样品可多次测定，有利于动力学研究。 可检测到10-9mol/L水平的变化。 优点： 例: 人血清乳酸脱氢酶活力的测定 L-乳酸 + NAD+ 丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸脱氢酶 九、酶的制备 盐析法 有机溶剂沉淀法 吸附法 十、酶的应用 工业 农业 医药 科学研究 十一、固定化酶（immobilized enzyme） 固定化酶是将水溶性的酶连接到固相载体上， 使它以固相的状态作用于底物，因此也称固相酶。 固定化酶的优点 固定化酶的理化性质 酶在水溶液中不稳定，一般不能反复使用，而且不易与产物分离，不利于产物的提纯和精制。 针对这些限制酶广泛应用的因素，将水溶性酶或游离细胞经过化学或物理手段处理，将酶束缚在一定的空间内，限制酶分子在此区间进行活跃的催化作用，成为不溶于水的固定化的酶或细胞。 固定化酶:固定在载体上，并在一定范围内进行催化反应的酶。 固定化酶的制备 ① 吸附法 吸附法 吸附法是通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法。 只需将酶液与具有活泼表面的吸附剂接触，再经洗涤除去未吸附的酶便能制得固定化酶。是最简单的固定化技术，在经济上也最具有吸引力。 ② 偶联法 共价结合（偶联）法共价结合（偶联）法是目前研究中最为活跃的方法。它的原理是酶蛋白分子上的功能基团和固相支持物表面上的反应基团之间形成共价键，因而将酶固定