酶的分离纯化摘要.ppt

Chapter 4 The Extraction, Separation and Purification of Enzyme 酶的分离纯化 Contents of chapter 4 第一节、发酵醪液预处理 一、 酶在细胞中分布及发酵醪液预处理 二、细胞破碎 三、发酵液的固液分离 第一节、发酵醪液预处理 一、酶在细胞中的分布及发酵醪预处理 1、酶在细胞中分布 胞外酶：水解酶类，易收集，不必破碎细胞，缓冲液或水浸泡细胞或发酵液离心得到上清液即为含酶液。 胞内酶：除水解酶类外的其它酶类，需破碎细胞，不同的酶分布部位不同，最好先将酶存在的细胞器分离后再破碎该细胞器，然后将酶用适当的缓冲溶液或水抽提。 2、酶分离原则： 在增加酶得率和纯度的同时，尽可能避免高温、过酸、过碱、剧烈的震荡及其它可能使酶丧失活力的一切操作过程。尽最大可能保存酶的活力。 （一）离心机的选择 离心机的种类 1、常速离心机 最大转速8000rpm(r/min), 用于细胞、细胞碎片和培养基残渣等分离； 2、高速（冷冻）离心机 1×104-2.5×104rpm,用于沉淀、细胞器等分离； 3、超速离心机 转速2.5-8×104rpm，用于DNA、RNA蛋白质及细胞器病毒分离纯化；检测纯度；沉降系数和相对分子量测定等。 分制备用、分析用、制备及分析用三种。分析用超速离心机装有光学检测系统、自动记录系统、数据处理系