第九章核酸代谢教材.pptVIP

一、核酸的酶促降解P283 根据对底物的专一性分为：核糖核酸酶(RNase)和脱氧核糖核酸酶(DNase) 根据切割位点分为：核酸外切酶和核酸内切酶。 1.核苷酸的生物合成P289 动植物、微生物可合成嘌呤或嘧啶的核苷酸，基本途径有： ①利用核糖、磷酸、Aa、CO2、NH3合成核苷酸，不经过碱基、核苷的中间阶段，称为“从头合成”途径或“从无到有”途径； ②利用体内游离的碱基或核苷合成核苷酸，称为补救途径。 2.基本概念P300 DNA复制(replication)：在亲代DNA双链的每一条链上，按照碱基配对准确地形成一条新的互补链，结果生成两个与亲代链相同的DNA分子的过程； 转录(transcription)：以DNA链为模板，通过碱基配对的方式将其中所含的遗传信息传给RNA链，合成与DNA互补的mRNA链的过程； 翻译(translation)：以mRNA链为模板，按照mRNA分子上三个核苷酸决定一种Aa的规则，合成具有特定Aa顺序的蛋白质的过程； 中心法则(The Central Dogma)：由DNA决定RNA的碱基顺序，又由RNA决定蛋白质中的Aa顺序，这叫中心法则，也叫信息流。P301 (一) DNA的复制 概念：复制时，DNA两条链解开，分别以每条链为模板合成互补链，形成的两个子代DNA中均有一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的。 实验依据：1958年 Meselson Stahl E.coli 同位素标记（15N）结合密度梯度离心法 2.DNA的半不连续复制P318 (Semidiscontinuous replication) DNA的两条链方向是相反的(5’→3’，3’→5’)； DNA合成需要DNA聚合酶，它只能使DNA链从5’→3’合成，所以复制是半不连续的。 要点： ①沿着复制叉(replication fork)移动的方向，先合成前导链(leading strand)，前导链复制是连续的，其复制方向与复制叉移动方向一致； 复制时双链打开，分开成两股，新链沿着张开的模板生成，复制中形成的这种Y字形的结构称为复制叉P308。 ②另外一条链(随后链,lagging strand)的合成是不连续的，复制叉打开后，也是按5’→3’方向即母链的3’→5’方向(与复制叉方向相反)合成若干个短片段，然后通过连接酶连接起来，所以整个过程是半不连续的。 冈崎片段P308 1968年日本生化学者冈崎用电镜及放射自显影技术，观察到DNA复制中出现一些不连续的片段，因而将这些不连续的片段称为冈崎片段。 (2)条件P303-306 底物：dNTP(dATP、dGTP 、 dCTP 、dTTP) 聚合酶(polymerase)：依赖DNA的DNA聚合酶(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，简写为DNA-pol； 模板(template)：解开成单链的DNA母链； 引物(primer)：提供3′-OH末端的寡核苷酸； 其他的酶和蛋白质因子：DNA解链酶(helicase) 、DNA旋转酶(gyrase)、引物酶 (primase)和引发体 (primosome)、 DNA连接酶(ligase)、单链结合蛋白(single-strand binding protein,SSB)。 (1)引物酶 已知的任何一种DNA聚合酶都不能从头合成一条新DNA链，DNA的合成需要一段引物。 大多数细胞中引物为RNA，合成这些引物的酶称为引物酶。 引物酶以单链DNA为模板，NTP为底物合成RNA。 (2) DNA聚合酶 以四种dNTP为底物，在DNA模板的指令下，按照碱基互补配对的原则，把dNTP逐个添加到引物或延伸链的3’－OH末端，形成3’,5’磷酸二酯键。新合成的链按5’→3’方向进行延伸。 DNA聚合酶Ⅰ 可以催化DNA链的延长（5’ →3’聚合） 由5’端水解DNA链（5’→3’核酸外切酶活性） 由3’端水解DNA链（3’ →5’核酸外切活性）校对 DNA聚合酶Ⅱ：多亚基酶，聚合作用，但聚合活力很低；具有3’→5’外切酶活性。 DNA聚合酶 Ⅲ：真正起复制作用的酶 由10种亚基组成的不对称二聚体 α、ε和θ构成核心酶 α亚基有聚合活性 ε亚基有3’→5’外切酶活性 (3)连接酶 催化双链DNA切口上5’-P与3’-OH的共价连接。 连接反应需要能量。 不催化两条游离DNA单链的结合。 (4)解螺旋酶（解链酶） 利用水解ATP释放的能量，催化双链DNA解开形成单链。 解链酶一般是多聚体的，最常见的是六聚体的形式。 (5)单链结合蛋白（SSB） 稳定已被解开的DNA单链，阻止复性和保护单链不被核酸酶降解。 (6)拓扑异构酶（旋转酶） 兼有内切酶和连接酶的活力，既能水解，又能连接磷酸二酯键。 Ⅰ型拓扑异构酶：使DNA一条链断裂和