医学分子遗传学复习绪论.docx

分子遗传学复习第一章 重组DNA技术-基因工程极其与医学的关系重组DNA技术：又称为基因克隆或分子克隆技术。它是基因工程的核心技术。包括限制性核酸内切酶等工具的应用，核酸分子杂交，基因克隆，DNA测序，PCR等限制性核酸内切酶：又称限制酶。是识别并特异性地切割双链DNA序列的一种核酸内切酶。切割形式：平端(blunt end) 对称轴切，粘性末端（sticky end）交错切。DNA变性：在加热、碱性等条件下下，DNA双螺旋的两条链间氢键断裂而分开成为单链。DNA的复性：变性DNA在除去变性条件下，又可以使两条碱基互补的单链回复成成双螺旋结构。核酸分子杂交技术：固相杂交（DNA印记southern blotting、RNA印记northern blotting）、液相杂交、菌落或噬斑原位杂交、斑点杂交（被测核酸经变性后可以直接点在滤膜上与探针进行杂交）、FISH（荧光原位杂交）FISH:将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.探针：是分子杂交的必需工具，是带有某种标记的一段碱基序列互补于待测基因序列的DNA或RNA或寡聚核苷酸。核酸分子杂交的应用：DNA印记—分析基因结构、基因限制性核酸内切酶片段长度多态性、基因同源性、基因拷贝数；RNA印记—检测特异性mRNA，分析基因表达情况及mRNA大小；菌落或噬斑原位杂交—从基因库中筛选出某种特异基因基因克隆；细胞原位杂交—分析检查特异基因或表达产物在细胞内定位；斑点杂交—检测基因缺失和表达水平。基因克隆：是从一群细胞中分离单一细胞，让其自己复制，产生许多完全相同的细胞。DNA克隆就是基因无性繁殖的过程。克隆过程：制备基因；选择载体；基因与克隆载体重组；重组DNA转化宿主细胞；培养含有重组DNA的宿主细胞。转化：是指某一基因型的细胞从周围介质中吸收来自另一基因型细胞的DNA而使受体的基因型和表型发生相应变化的现象。重组DNA分子：经人工手段对其序列进行了改造和重新组合的DNA。PCR及其原理：聚合酶链反应是模拟体内DNA复制条件，应用DNA聚合酶反应，体外特异性扩增某一DNA片段的技术。用两条与待扩增DNA链5’端互补的寡核苷酸，即引物，经过变性、退火、延伸重复循环，使待测DNA扩增。基因工程（Gene Engineering）：某种生物细胞的基因或人工合成的基因经重组后,引入另一种生物细胞,在此种细胞内大量合成该基因编码的蛋白质(或多肽),改变此种细胞的基因表型。合成的蛋白质(或多肽)提纯后形成基因工程产品。蛋白质工程：以蛋白质空间结构及其与生物学功能的关系为基础，通过分子设计和由设计结果所指导的特定的基因修饰,而实现的对天然蛋白质的定向改造，从而得到性能更符合人类要求的非天然蛋白质。RT-PCR（反转录-聚合酶链反应）：是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。载体：是将外源目的基因导入宿主细胞，使外源目的基因在宿主细胞体内复制和表达的一类DNA分子。克隆载体的特点（自主复制、有多个单切口核酸内切酶酶切位点、有药物选择性遗传标志、在细菌内有较多的复制拷贝数）charon噬菌体：西格玛噬菌体“非生活区”的DNA中含有EcoR I切口，用人工方法除去多数EcoR I切口，只保留一个形成人工载体称为～。穿梭质粒：混合型载体含有原核生物的复制起始位点和真核生物的早期转录单位，外源基因导入这种载体后能在原核细胞中复制真核细胞中表达，称为～。考斯质粒：西格玛噬菌体cos部位序列和质粒的重组体。含有药物抗性筛选基因、质粒复制起始位点、单个酶切位点、噬菌体cos末端。能够插入大片段外源DNA，并且像噬菌体一样在体内组装繁殖。酵母人工染色体YAC克隆基因的筛选方法：药物筛选基因；显色反应；菌落或噬斑原位杂交；内切酶片段分析；选择性翻译；捕获性翻译；放射免疫；测序表达载体：为使插入的外源DNA序列可转录翻译成多肽链而特意设计的载体称为表达载体。单核苷酸多态性（SNP）：在某一人群中（某一国家、民族、地区）的正常个体间的基因组DNA的某些位点的单个碱基对存在差别，即存在两种或两种以上的等位基因，最少一种等位基因出现频率不少于1%。DNA指纹（DNA fingerprints）：DNA经限制酶酶切后，以重复序列中的核心序列为探针进行DNA印迹杂交所形成的杂交带型。第二章基因的结构和组合ORF：开放读码框，指DNA序列上从蛋白质合成的起始密码子（ATG）到终止密码子为止的一个连续编码序列。基因：遗传的物质基础，是DNA分子上具有遗传信息的