分子生物学 第五章 分子生物学.ppt

（四）其他调控元件 1.增强子 增强子是能够远距离作用调节启动子来增强转录效率的DNA序列。 增强子和启动子的差异 2.沉默子 沉默子是能够抑制附近基因表达的DNA序列。沉默子对基因转录调控的作用特点与增强子类似，距离和方向都无关紧要，因此也称为负增强子。 3.绝缘子 绝缘子是一段能阻断增强子使转录失活或防止沉默子使异染色质延伸保护转录进行的DNA元件。 （五）转录过程 （a－1）TBP 与TFIIB, TFIIF和RNA聚合酶II在起始子处形成最小起始复合物。 （五）转录过程 （a－2）添加TFIIH, TFIIE和ATP使得DNA在起始区解链，RNA聚合酶的最大亚基的CTD部分磷酸化。 （五）转录过程 (b) ATP供能下, TFIIH的解旋酶活性 引起DNA进一步解旋，转录泡增大。RNA聚合酶II离开启动子。 （五）转录过程 (c) TEFb对CTD进一步磷酸化，RNA连续合成。延伸时不需要TFIIE和TFIIH。 第三节 RNA的加工 一、概述 （一）概念 RNA加工就是前体RNA（pre-RNA）转变为成熟RNA分子的过程。 （二）方式 （1）核苷酸的切除 （2）添加核苷酸 （3）碱基或糖苷的修饰 二、rRNA的加工 （一）原核生物rRNA的加工 ①转录产物内部碱基配对折叠形成茎环结构； ②一些特定的蛋白能够识别这些茎环结构与之结合，形成RNP； （一）原核生物rRNA的加工 特定核苷酸甲基化； RNAaseⅢ剪切释放出5S、16S、23S前体分子 RNAase M5、M16、M23分别在其不同前体分子末端进一步剪切，最终释放成熟的5S、16S、23S rRNA分子。 （一）真核生物rRNA的加工 47S前体rRNA首先切除外部转录间隔区(ETS),再切除内部转录间隔区(ITS1)，释放出32S和20S两个前体rRNA分子； （二）真核生物rRNA的加工 接下来32S和20S前体rRNA进一步修剪，20S前体rRNA加工成18S成熟的rRNA，而32S前体rRNA加工成5.8S和28 S rRNA； （一）原核生物tRNA的加工 三、tRNA的加工 ①前体tRNA转录产物首先折叠成茎环结构； ②内切核酸酶RNAase E、F在前体3端切除一个侧翼序列，留下额外9nt； （一）原核生物tRNA的加工 ③外切酶RNAase D切除3’端的其中7nt； ④内切酶RNAase P切除前体5’端的28nt，直接形成成熟的5’端；碱基修饰。 （一）原核生物tRNA的加工 ⑤随后RNAase D继续切除剩余的2nt，形成最终成熟的3’端（5’- CCA-3’）； ⑥最后进行一系列的碱基修饰。 （二）真核生物tRNA的加工 ①前体转录产物折叠成特征茎环二级结构； ②内切酶识别二级结构后，切除5’端16nt前导区和3’ 端额外的2nt；。 （二）真核生物tRNA的加工 ③tRNA核苷酸转移酶将5-CCA-3序列添加到3’端，形成成熟的3’端； ④内切酶切除14nt的内含子，再将两个外显子片段连接； ⑤最后进行一系列的碱基修饰。 （三）真核生物mRNA的加工 1. 5’ 加帽 真核生物mRNA转录开始后不久，RNA链长度超过20-30nt之前，在延伸RNA分子的5’端就发生了加帽反应。 帽子的功能 ①对5’外切核酸酶形成屏障，有效保护和稳定转录产物； ②有助于前体mRNA的剪接和转运到细胞质； ③能够提高翻译的效率。 2. 3’加尾 蛋白因子识别信号序列AAUAAA后，结合到前体mRNA上，组装成复合体； 核酸内切酶对前体mRNA特定位点进行剪切； 最后聚腺苷酸聚合酶在剪切后的3’端添加多至250个A残基。 3.内含子剪接 （1）剪接：把内含子从前体mRNA中去除，而将外显子拼接在一起的过程。 （2）内含子与外显子 内含子：断裂基因的非编码区，可被转录，但在mRNA加工过程中被剪切掉。 外显子：断裂基因的编码区，可被转录，在mRNA加工过程中被保留下来。 （3）剪接机制 剪接体参与 两次转酯反应 GT－AG法则 核酶 核酶指一种可以催化特定生化反应的RNA分子。 Thomas R. Cech 1947- 1989年诺贝尔化学奖 4.可变剪接 可变剪接是指前体mRNA分子通过不同的剪接方式能够产生一种以上的成熟mRNA分子。 5.反式剪接 不同RNA分子间发生外显子的连接，这种剪接方式称为反式剪接。 6. RNA编辑 RNA编辑是指原始转录产物的序列发生变化，从而导致编码的蛋白与基因组编码的不同。 第四节 反转录 一、概念 反转录：以RNA为模板合成DNA的过程称为反转录。反转录过程由反转录酶催化，合成的DNA链称为cDNA。 二、反转录酶 反转录过程由反转录酶催化