河源人工种植金银花中绿原酸 含量测定和提取工艺研究.docVIP

河源人工种植金银花中绿原酸 含量测定和提取工艺研究 　　摘要：目的：检测河源人工种植金银花中的绿原酸含量，优化提取工艺。方法：将人工种植的金银花干燥后作为研究对象，采用紫光-可见分光光度法检测样本中的绿原酸含量，并对绿原酸提取的工艺条件进行设计、优化。结果：提取绿原酸的最佳工艺条件应为提取液酸碱度pH=7，微波功率450W，微波辐射时间45min，料液比1：25，溶剂体积分数60%。绿原酸在人工种植金银花中的含量为6.38%。结论：在人工种植的金银花中，所含绿原酸水平较高，能较好地满足药用要求，可大面积推广栽培。 　　关键词：绿原酸；金银花；提取工艺；人工种植 　　金银花（也称双花）是临床应用十分广泛的一种中药材，其具有凉散风热、清热解毒之功效，也是民间的常用药物。金银花含有的绿原酸在纯度、含量方面均较高，同时绿原酸也是衡量金银花质量高低的一个重要标准[1]。为明确人工种植金银花中的绿原酸含量，本研究采用了紫光-可见分光光度法对人工种植的金银花中的绿原酸含量进行了检测，现报道如下。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料 　　金银花取自深圳市中康福药业有限公司于广东省河源市的中药材种植基地，并经高级农艺师鉴别、确认，是忍冬科忍冬植物的花蕾。将采集到的忍冬花蕾放置于恒温箱中，烘干（60℃）至恒质量后取出，样品自然阴干。阴干后将样品捣碎，使用80目筛筛选，备用。试剂NaOH、H2SO4、乙醇等都为分析纯，绿原酸对照品（99%）由上海纯优生物科技公司提供。 　　1.2 仪器 　　紫外-可见分光光度计：日本岛津公司，UV-2450型； 　　微波催化萃取（合成）仪：北京祥鹄科技公司，XH-300A型； 　　精密酸度计：上海雷磁仪器厂，pHS-2C型； 　　电子天平：METTLER TOLEDO，L-S型； 　　旋转蒸发器：宏兴科教仪器厂；RE-52A型。 　　2 方法与结果 　　2.1 建立标准曲线 　　称取1.0mg绿原酸对照品，放入乙醇中，溶解、摇匀，加乙醇至刻度线（50ml），获得绿原酸对照品溶液（20μg/ml）。在量瓶（10ml）中加入绿原酸对照品溶液0.5ml，加乙醇至刻度线，摇匀。使用紫外-可见光分光光度计扫描溶液，波长200nm~400nm，明确329nm为绿原酸对照品可吸收波长的最大值。取绿原酸对照品溶液和乙醇，分别配制出不同浓度的对照品溶液（2.0μg/ml、5.0μg/ml、7.5μg/ml、10.0μg/ml、12.5μg/ml），以波长为329nm的紫光进行照射，测得吸光度A。将绿原酸浓度C、吸光度A分别作为横坐标和纵坐标，描绘A-C曲线，获得吸光度的回顾方程（A=C×0.05528-0.003389，r=0.9997），由此说明绿原酸对照品溶液在2.0μg/ml~12.5μg/ml这一浓度范围内，线性关系良好。 　　2.2 制备样品溶液 　　称取一定量金银花粉末，按照一定的pH值要求、乙醇体积分数、料液比，将其放入乙醇中溶液中浸润30min，然后以微波辐射6min，浸提过滤，并将滤渣再次浸提，将两次获得的滤液合并。在60℃下，对滤液进行干燥。使用盐酸（0.2mol/L）溶液干燥后的粗提取物，定容（100ml），获得样品溶液。 　　2.3 检测绿原酸含量 　　取0.1ml样品溶液，加乙醇至50ml刻度线，在波长329nm时，使用紫外-可见光分光光度计检测样品吸光度。然后根据如下公式，计算出绿原酸含量： 　　含量（%）=100ml×提取量/样品质量；提取量（g/ml）=稀释倍数×（质量浓度×10-6） 　　2.4 绿原酸提取工艺 　　采用单因素实验分析，考察以下因素：提取液酸碱度A、微波功率B、微波辐射时间C、物料比D、容积体积分数E在绿原酸提取过程中的作用。为明确多因素在绿原酸提取过程中发挥的作用，还进行了正交实验研究。经反复实验、研究，确定A值为7，B值为500W， C值为45min，D值为1：25，E值为70%，根据5因素实验结果，设计出正交实验的5因素-4水平表（见表1）。 　　表1 正交实验的5因素-4水平表 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　应用正交表L16（45）安排实验，获得5因素-4水平的正交实验结果，通过对实验结果进行方差分析，可得出D（料液比）、E（溶剂体积分数）均是影响绿原酸提取率的主要因素，而C（微波辐射时间）、A（提取液酸碱度）、B（微波功率）对提取率的影响都不显著，见表2。并得出最佳工艺条件应为：A4 B2C2D3E2（即提取液酸碱度pH=7，微波功率450W，微波辐射时间45min，料液比1：25，溶剂体积分数60%）。 　　表2 正交实验方差分析结果