小鼠端粒酶逆转录酶（mTERT）启动子基因的克隆及其靶向调控检测.docVIP

小鼠端粒酶逆转录酶（mTERT）启动子基因的克隆及其靶向调控检测 　　摘 要 实验目的 构建小鼠端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase， TERT）基因启动子调控EGFP基因表达载体，并研究其在细胞中的转录活性。实验方法 从小鼠肌肉组织中提取全基因组，以它为模板，克隆得到mTERT启动子基因（mTERTp）片段。得到的片段经Sac I/Xba I双酶切后插入到载体pGL3-Enhancer上，得到重组质粒pmTERTp。以pEGFP-N1为模板PCR扩增得到EGFP片段，片段EGFP经Nde I/Xba I双酶切后插入到载体pmTERTp上，得到重组质粒pmTERTp-EGFP。通过脂质体介导重组质粒pmTERTp-EGFP瞬时转染NIH-3T3细胞和B16细胞，观察EGFP蛋白的表达情况。实验结果 重组质粒pmTERTp-EGFP转染B16细胞48h后，可以看到EGFP蛋白大量表达。而在NIH-3T3细胞中EGFP蛋白不表达。结论 mTERT启动子在正常细胞中无明显的转录活性，而在肿瘤细胞中的转录活性很高，说明mTERT启动子能特异性调控目的基因只在肿瘤细胞中表达。 　　关键词mTERT启动子 基因治疗 靶向转录 　　【分类号】：R346 　　端粒酶是一种核糖核蛋白，由端粒酶RNA（TR）、端粒酶相关蛋白（TP）和端粒酶逆