冬虫夏草二级接种步骤的初步研究.docVIP

冬虫夏草二级接种步骤的初步研究 论文关键词：冬虫夏草；二级接种；人工培养；接种瓶 　　论文摘要：冬虫夏草（Cordycepsnbsp;sinensisnbsp;sacc）具有很大的经济价值，但目前天然冬虫夏草逐渐减少。现在人们开始了人工培养冬虫夏草。在实验中冬虫夏草二级接种是人工培养冬虫夏草的关键。冬虫夏草二级接种是指由一级种接到接种瓶内。二级种更有利于冬虫夏草子实体的长出。接种前需要配制培养基和灭菌。接种时动作要快且准降低污染率。接种后，放在黑暗室温下培养，观察结果，分析原因，探索更好的方法，从而更利于冬虫夏草子实体的长出。nbsp; 　　nbsp; 　　nbsp; 　　冬虫夏草，冬天是虫，夏天是草，冬虫夏草简称虫草，是冬季真菌寄生于虫草蛾幼虫体内，到了夏季发育而成。冬虫夏草主要分布在青海，西藏，四川，云南，贵州，甘肃海拔4000米左右的高海拔地区，而且含量非常少。冬虫夏草虫体呈金黄色，淡黄色或黄棕色，药用价值高功效好。在国内外被视为珍品，市场需求量大，但因其天然资源量稀少，故价格十分贵。nbsp; 　　冬虫夏草可以降低血液中的胆固醇和甘油三酯，提高对人体有利的高密度脂蛋白，减轻动脉粥样硬化。nbsp; 　　除次之外，冬虫夏草还具有直接抗病毒、调节中枢神经系统功能、调节性功能等作用。冬虫夏草能对人体起到如此全面的保健作用，可谓神奇之极，也无愧自古以来“仙草”的美称。在现代社会，服用冬虫夏草已不仅仅是本身身体健康的保证，更重要的是由此带来的极致健康生活品质。nbsp; 　　nbsp; 　　1nbsp;材料和方法nbsp; 　　nbsp; 　　1.1nbsp;材料nbsp; 　　在做二级接种实验时所用的材料：冬虫夏草(Cordycepsnbsp;sinensisnbsp;sacc)一级种是由2005年5月从西藏采来的冬虫夏草子实体经无菌分离培养所得。根据多次试验培养基成分结论如下：葡萄糖10g、磷酸氢二钾1g、蛋白胨7g、维生素B2两片、七水硫酸镁0.3g、水1000ml、650ml大米。nbsp; 　　1.2nbsp;方法nbsp; 　　药品的称量：对于一克以下的用精确的天平称量。在称量过程中，先调节天平所在的平面平衡以及天平平衡，并在左盘中放张滤纸后也要平衡。然后，制定规格，用药匙向左盘中放入所要称取得药品直到平衡。但要注意先把天平放下来，再取盘中的药品。nbsp; 　　大于等于一克的物品用托盘天平量取即可。首先调节托盘天平平衡，在这一过程中，要注意先把游码调到零点，调平后按左物右码的规则。移动游码直到所需的规格，然后，用药匙向左盘中放药品直到平衡，则左盘中的药品即为所称量的。nbsp; 　　用量筒量取1000ml的水和650ml的大米。nbsp; 　　在进行二级种培养基制作过程中，我们运用了一个方案nbsp; 　　nbsp;将量好的葡萄糖、磷酸氢二钾、蛋白胨，维生素B2、七水硫酸镁，同时溶解在1000ml水中，用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。设总体积为v，称取0.65v大米约650ml的大米，并用自来水冲洗一遍。把冲洗干净的大米和所配制的溶液放入蒸压锅内，蒸成熟米饭，然后冷直室温，再平均装到十个接种瓶（本试验用的是白色耐高温高压的罐头瓶）内。在装的过程中必须使米饭疏松平齐，然后用细绳和单层塑料袋扎上瓶口。完成后再灭菌。nbsp; 　　灭菌过程如下：把接种瓶放到灭菌筐中，在灭菌筐放进高压灭菌锅前先检查高压灭菌锅内是否有足够的水，检查标准是看锅底部中央有一个圆孔，当水面高于或等于圆孔面时就可以。再打开电源，然后按设置按钮，通过上下键来调节温度、时间，即125摄氏度、30分钟。最后按液相按钮。此时也可以设定一个保温温度。灭菌后切断电源，通过红外感应打开盖[开盖时身体侧向一旁，因为开盖会有大量热气冒出以免烫伤]小心地把接种瓶摆放在桌面上冷直二十四小时。nbsp; 　　二级接种是指将试管[一级]内的冬虫夏草菌丝接到空间相对较大的接种瓶内，从而有利于冬虫夏草子实体的长出。 　　接种步骤：nbsp; 　　接种前，需将净化工作台提前打开二十分钟，一便工作台内的空气是纯净的，同时也节省时间，提高工作效率。在净化工作台上做实验时，需将净化工作台的每一个面都要有用酒精棉彻底擦干净，台上的任何物品也要彻底擦干净。接种时，手也要用酒精棉擦干净，还要带口罩。接种所用的任何仪器如接种铲也要擦干净。接种时，把接种瓶打开试管口不能碰到接种瓶口，而且不能在接种瓶口的上方，用接种铲把试管内的三分之一或四分之一的菌丝快速地放到接种瓶内，并且要使菌丝与大米接触（生长菌丝的面与大米接触]提高菌丝扩展速度。接种时要快速低污染地工作，接种过程中接种铲不要碰到任何面。接种完毕后，