动植物油脂 植物油中豆甾二烯的测定—高效液相色谱法.docVIP

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准等同采用国际标准ISO (英文版)。 ISO 15788.2：2003一致，做了下列编辑性修改： ――本国际标准改为本标准； ――删除了国际标准的前言； 本标准起草人：本标准。动植物油脂 植物油中豆甾二烯的测定—高效液相色谱法 范围 本标准规定了甾醇二烯，尤其是豆甾二烯的测定方法。甾醇二烯主要是在漂白也有部分是在水蒸汽洗涤和脱嗅过程上由于甾醇类物质脱水形成的。本方法是一个较为适宜的筛选方法，用于测定未精炼油如初榨橄榄油中是否存在精炼油。 注：ISO 15788.1是植物油中豆甾二烯测定的基准方法，而本方法可用作为一种快速筛选方法。鉴于这种方法的精确性（见附录A），初榨橄榄油样品接近于国际组强（IOOC，EC）规定的极限值，因此可用ISO 15788.1规定的气液色谱法进行校验。 规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法ISO 12228：1999） 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 豆甾二烯含量 stigmastadienes content 本标准规定条件下，通过液相色谱法分离的豆甾二烯部分。 注：以毫克每千克（mg/kg）表示。 甾醇二烯含量 steradienes content 本标准规定条件下，通过液相色谱法分离的所有甾醇二烯部分。 注：以毫克每千克（mg/kg）表示。原理 原理 在硅胶柱上用石油醚将甾醇二烯按非极性脂类化合物从其他由类脂物质为主要组成的部分中分离出来。石油醚洗脱液浓缩后，用反相高效液相色谱法分离，在235nm处紫外检测分析。按样品类型分别采用内标法或或外标法定量。 试剂 警告：应注意危险品操作规则。操作时应遵循技术上、组织上和个人安全规范。 除非另有说明，仅使用经确认过的分析纯试剂。 水：至少符合GB/T 6682中一级水要求。 柱层析用硅胶60：颗径0.063mm～0.200mm，或0.063mm～0.100mmL) ，含水量2g/100g。 干硅胶置于瓷盘内，在160℃的烘箱中烘干12h，然后在干燥器内冷却至室温。称取98g（精确至1g）干燥后的硅胶置于具塞磨口锥形瓶中，加入2g水（精确至0.01g），用力振摇1min，并使硅胶在密闭容器过夜，以调整硅胶水含量为2g/100g。 石油醚：沸程40℃~60℃。 乙腈：色谱纯。 叔丁基甲基醚，色谱纯。 异辛烷。 3，5-胆甾二烯2)，纯度≥95%。 以5α-胆甾醇作为内标物，采用气相色谱分析检查胆甾二烯标准的纯度。在检查试验时，按GB/T XXXXX规定的气相色谱法测定甾醇含量的测定条件进行。氢火焰离子化检测器的响应因子应为1.0 。考虑到甾醇二烯测定过程所得浓度。 储备溶液标准溶液。 3，5-胆甾二烯储备液：浓度1mg/mL。 称取3，5-胆甾二烯50.0mg（精确至0.1mg），加入50mL容量瓶中。用叔丁基甲基醚（5.5）溶解和稀释，并定容至刻度。 用于液相色谱的3，5-胆甾二烯标准溶液。 外标标准溶液，浓度为10μg/mL。 吸取100μL 3，5-胆甾二烯溶液（5.8.1）加入10mL容量瓶中，用乙腈/叔丁基甲基醚（5.8.4）定容至刻度。 每20μL溶液中含有0.20μg，用于注入到高效液相色谱柱中。标准溶液的浓度取决于被分析油的性质。在粗制油中豆甾二烯含量小于0.5mg/kg的情况下，外标液浓度应为0.2μg/mL。 内标标准溶液，浓度为2μg/mL。 吸取100μL 3，5-胆甾二烯溶液（5.8.1）加入50mL容量瓶中，并用石油醚稀释至刻度（5.3）。 所需标准溶液的浓度取决于被分析油的性质。在粗制油中豆甾二烯含量小于0.5mg/kg的情况下，外标液浓度应为0.2μg/mL。 用于气相色谱的5α-胆甾醇标准溶液，浓度1mg/mL。 称取5α-胆甾醇3）50.0mg（精确至0.1mg），加入50mL容量瓶中。用异辛烷稀释至刻度（5.6）。用该种溶液标定3，5-胆甾二烯的纯度（5.8.2）的操作如下：g。 仪器设备 实验常规仪器，以及下列特殊的仪器。 棉花或玻璃棉。 棉花需用石油醚提取8h，脱脂。 层析柱：玻璃制成，内径10mm，长150mm，具25mL储液器。 锥形瓶：容量25mL。 容量瓶：容量5mL，10mL，50mL。 烧杯：数个规格。 高效液相色谱系统：由高压泵、进样器（具20μL和100μL定量环）、紫外检测器（