抗体药物的质量控制方法__培训课件.ppt

核酸杂交 动画2 * * 抗体药物产品质控方法概述2012.12 目录 （一）理化检测 （二）生物学测定 （三）非免疫球蛋白杂质分析 1 蛋白含量测定：Lowry法、双缩脲法（药典） 原理：基于蛋白质在碱性环境中与Cu2+反应 形成复合物，并与合适的试剂 （Lowry：酚试剂；双缩脲：双缩脲试剂） 形成有颜色且稳定的络合物，利用标准 蛋白质作对照， 采用紫外-分光光度法测 定蛋白质含量。 BCA法：基本原理与lowry，双缩脲基本相同 BCA(bicinchoninic acid)钠盐 是一种稳定的水溶性复合物， 可与Cu+高度特异性结合，产 生紫色复合物。该复合物在 562 nm处有最大吸光值，并 与蛋白浓度成正比。以BSA 为标准品求得标准曲线， 进而计算未知蛋白样品的浓度 2 装量 标示装量以重量计的产品以“重量法”检查装量，除另有规定外取供试品5个（50g以上者3个），除去外盖和标签，容器外壁用适宜的方法清洁并干燥，分别精密称定重量，除去内容物，容器用适宜的溶剂洗净并干燥，再分别精密称定空容器的重量，求出每个容器内容物的装量与平均装量，应符合规定。如有1个不符合规定，则另取5个（或3个）复试。 溶剂通过半透膜由低浓度溶液向高浓度溶液扩散的现象称作渗透，阻止渗透所需施加的压力，即为渗透压。 正常人体液渗透压为285~310 mOsmol/kg，生理盐水和5%葡萄糖溶液与之相当。 渗透压的测定一般由冰点降低法间接求得。通常采用测量溶液冰点下降来间接测定其毫渗透压摩尔浓度。 　　① ：△T=Km 式①中，K--冰点降低常数，溶剂不同，K值不同，对水溶剂K=1.86；m--渗透压摩尔浓度。 　　而渗透压符合： ②： P=Km 　　式②中，P‘为渗透压，K’为渗透压常数，m为溶液重量摩尔浓度。 　　由于式①和式②中浓度等同，故可以用冰点下降法测定溶液的渗透压摩尔浓度。测定药物溶液的渗透压时，只要能测得药物溶液的冰点降低值，就可求出。 　　对药物的注射剂、滴眼剂等，要求制成适合人体的等渗溶液。  3 渗透压 美国Advanced公司Fiske 210型冰点渗透仪 4-1 可见异物检查 “可见异物系指存在于注射液和滴眼剂中，在规定条件下目视观测到的任何不溶性物质。” ——《2010版药典》附录V B 方法要点：1 复溶冻干制剂，环境100级，方法按说明书 2 抽检量5支，去标签清除外壁污痕，静置一段 时间（抗体制剂要过夜） 3 设备 4 人员要求：校正视力5.0 以上，无色盲 5 无色溶液 1000-1500lx， 有色或透明塑料容器， 2000-3000lx 6 标准 6-2 不溶性微粒检查法 “本法在可见异物检查符合规定后，用以检查静脉注射剂（溶液型注射液、折射用无菌粉末、注射用浓溶液）及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒的大小及数量。”—— 《2010版药典》附录 V I 方法要点：光阻法 1 环境要求100级 2 溶剂要求用不大于1.0μm的微孔滤膜过滤 3 外壁洗净后按要求复溶样品 4 静置2分钟或适当时间（抗体不超过4小时）脱气 5 依法测4支或混匀后测4次，取后3组数据计算平均值 6 设备及原理 7 标准 100ml以下静脉注射液 （无菌粉末），≥10μm微粒不 多于6000个，≥25μm微粒不多 于600个 7-1 鉴别试验 （ELISA方法） ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附剂测定） 指将可溶性的抗原或抗体吸附到聚苯乙烯等固相载体上，进行免疫反应的定性（鉴别）和定量（活性）方法。 方法分类： 1 双抗体夹心法 2 间接法 3 竞争法 ELISA 原理动画 7-2 鉴别试验（免疫荧光） 免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ） 基于免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用此技术进行组织或细胞内抗原物质的定位（鉴别）和定量（活性，如仙台CIU检测）。 方法分类： 1 直接法（Direct） 2 间接法（Indirect） 免疫荧光 动画